常用的色譜方法(常用的色譜定量方法)

1.有哪些常用的色譜定量方法

色譜分析常用的定量方法：歸一化法、內(nèi)標(biāo)法和內(nèi)加（增量）內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法。

1、面積歸一化法優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，當(dāng)操作條件變化時(shí)對(duì)結(jié)果影響較小，宜于分析多組分試樣中各組分的含量。但是試樣中所有組分必須全部出峰，因此，此法在使用中受到一定限制。

2、外標(biāo)法是用純物質(zhì)配成一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液（或直接購(gòu)買(mǎi)不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液）分別取一定體積，注入色譜儀，根據(jù)峰面積和濃度做標(biāo)準(zhǔn)曲線。在分析未知樣時(shí)按與標(biāo)準(zhǔn)曲線相同的操作條件和方法，由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出所需組分的濃度（現(xiàn)在在工作站上直接就能求出濃度）。

此法要求進(jìn)樣準(zhǔn)確，操作條件穩(wěn)定，分析樣品和標(biāo)準(zhǔn)曲線條件必須一致。 3、內(nèi)標(biāo)法是試樣中所有組分不能全部出峰或只要求測(cè)定試樣中某個(gè)或某幾個(gè)組分時(shí)，可采用此法。

內(nèi)標(biāo)法是在準(zhǔn)確稱(chēng)取一定量的試樣中，加入一定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（內(nèi)標(biāo)物），根據(jù)內(nèi)標(biāo)物和試樣的質(zhì)量以及色譜圖上的相應(yīng)峰面積，計(jì)算待測(cè)組分的含量。內(nèi)標(biāo)法的關(guān)鍵是選擇合適的內(nèi)標(biāo)物，內(nèi)標(biāo)物應(yīng)是試樣中不存在的純物質(zhì)，物質(zhì)與被測(cè)物質(zhì)相近，能溶于樣品中，但不能于樣品發(fā)生反應(yīng)。

此法比較費(fèi)事，一般不使用于快速分析。

2.有哪些常用的色譜定量方法

色譜定量方法比較2006年12月20日

星期三

15:31定量分析常用術(shù)語(yǔ)：

樣品（sample）含有帶測(cè)物，供色譜分析的溶液。分為標(biāo)樣和未知樣。

標(biāo)樣（standard）濃度已知的純品。

未知樣（unknow）濃度待測(cè)的混合物。

樣品量（sample

weight）待測(cè)樣品的原始稱(chēng)樣量。

稀釋度（dilution）未知樣的稀釋倍數(shù)。

組分（componance）欲做定量分析的色譜峰，即含量未知的被測(cè)物。

組分的量（amount）被測(cè)物質(zhì)的含量（或濃度）。

積分（integerity）由計(jì)算機(jī)對(duì)色譜峰進(jìn)行的峰面積測(cè)量的計(jì)算過(guò)程。

校正曲線（calibration

curve）組分含量對(duì)響應(yīng)值的線性曲線，由已知量的標(biāo)準(zhǔn)物建立，用于測(cè)定待測(cè)物的未知含量。

常用的定量方法

標(biāo)準(zhǔn)曲線法，分為外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法。

外標(biāo)法在液相色譜中用的最多。

內(nèi)標(biāo)法準(zhǔn)確但是麻煩，在標(biāo)準(zhǔn)方法中用的最多。

外標(biāo)法

用被測(cè)化合物的純品作為標(biāo)準(zhǔn)樣品，配制成一系列的已知濃度的標(biāo)樣。

注入色譜柱的到其響應(yīng)值（峰面積）。

在一定范圍內(nèi)，標(biāo)樣的濃度與響應(yīng)值之間存在較好的線性關(guān)系，即W=f*A，制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。

在完全相同的實(shí)驗(yàn)條件下，注入未知樣品，得到欲測(cè)組分的響應(yīng)值。

根據(jù)已知的系數(shù)f，即可求出欲測(cè)組分的濃度

外標(biāo)法的優(yōu)點(diǎn)：

操作、計(jì)算簡(jiǎn)單，是一種常用的定量方法。

無(wú)需各組分都被檢出、洗脫。

需要標(biāo)樣。

標(biāo)樣及未知樣品的測(cè)定條件要一致。

進(jìn)樣體積要準(zhǔn)確。

外標(biāo)法缺點(diǎn)：

實(shí)驗(yàn)條件要求高，如檢測(cè)器的靈敏度，流速、流動(dòng)相組成的不能發(fā)生變化；每次進(jìn)樣體積要有好的重復(fù)性。

內(nèi)標(biāo)法

操作：

將已知量的內(nèi)標(biāo)樣加入標(biāo)準(zhǔn)樣品，制成混合標(biāo)樣，并配制一系列的已知濃度的工作標(biāo)樣?；旌蠘?biāo)樣中標(biāo)樣與內(nèi)標(biāo)樣的摩爾比不變。

注入色譜柱，以（標(biāo)樣峰面積/內(nèi)標(biāo)樣峰面積）為響應(yīng)值。

根據(jù)響應(yīng)值與工作標(biāo)樣濃度之間存在的線性關(guān)系，即W=f*A，制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。

將已知量的內(nèi)標(biāo)樣加入未知樣品，注入色譜柱，得到欲測(cè)組分的響應(yīng)值。

根據(jù)已知的系數(shù)f，即可求出欲測(cè)組分的濃度

內(nèi)標(biāo)法的特點(diǎn)：

操作過(guò)程中樣品和內(nèi)標(biāo)是混合在一起注入色譜柱的，因此只要混合溶液中被測(cè)組分與內(nèi)標(biāo)的量的比值恒定，上樣體積的變化不會(huì)影響影響定量結(jié)果。

內(nèi)標(biāo)法抵消了上樣體積，乃至流動(dòng)相、檢測(cè)器的影響，因此比外標(biāo)法精確。

3.常見(jiàn)的色譜分離方法有哪些

常見(jiàn)的色譜分離方法有哪些

液相色譜按分離機(jī)理分為吸附、分配、交換、排阻以及親和五種類(lèi)型.

利用組分在吸附劑（固定相）上的吸附能力強(qiáng)弱不同而得以分離的方法，稱(chēng)為吸附色譜法.固定相是固體，目前這種分離模式在液相色譜中用途很小.

利用組分在固定液或者鍵合固定相（固定相）中溶解度不同而達(dá)到分離的方法稱(chēng)為分配色譜法.固定相是涂覆的固定液或者鍵合的固定相，是目前主流的分離模式，涵蓋了目前液相色譜應(yīng)用范圍的大部.

利用組分在離子交換劑（固定相）上的親和力大小不同而達(dá)到分離的方法，稱(chēng)為離子交換色譜法.該分離模式主要用來(lái)分離離子型化合物，正是由于如此，現(xiàn)在離子色譜已經(jīng)從液相色譜中分離出來(lái)，稱(chēng)為離子色譜.

利用大小不同的分子在多孔固定相中的選擇滲透而達(dá)到分離的方法，稱(chēng)為凝膠色譜法或尺寸排阻色譜法.這個(gè)主要用來(lái)分離高分子子化合物，比如蛋白、比如聚合物.

利用不同組分與固定相（固定化分子）的高專(zhuān)屬性親和力進(jìn)行分離的稱(chēng)為親和色譜法，常用于蛋白質(zhì)分離.

4.色譜法有哪四種常見(jiàn)的方法

高效液相色譜法處理，以指示的 ①的高壓力：更大的阻力，流動(dòng)的液體通過(guò)高壓迅速通過(guò)該柱通過(guò)柱的流動(dòng)相，液體載體。

②高效：分離效率高。選擇一個(gè)固定相和流動(dòng)相，以便達(dá)到最佳的分離效果，并且是工業(yè)精餾塔和氣相色譜分離性能高出許多倍。

③高靈敏度：紫外檢測(cè)器可達(dá)0.01ng，μL級(jí)的注射量。的 ④由高性能液相色譜法分析，特別是高沸點(diǎn)的分離和分析，大分子，強(qiáng)極性，熱穩(wěn)定性差的化合物，可用于廣泛的應(yīng)用范圍：70%以上的有機(jī)化合物的，示出的優(yōu)點(diǎn)。

⑤分析速度快，載液的流速快：速度更快，更經(jīng)典的液相色譜通常在15至30分鐘的樣品分析，部分樣品甚至在五分鐘內(nèi)完成，一般不超過(guò)1小時(shí)。 此外，高效液相層析柱可？？反復(fù)使用，和樣品不被破壞，易回收等優(yōu)點(diǎn)，但也有缺點(diǎn)，與氣相色譜法相比，有自己的長(zhǎng)處和優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)。

的缺點(diǎn)的高性能液相色譜法“列效果。從噴射器到檢測(cè)器上，在除了比支柱死空間（噴射器，柱接頭，連接管和檢測(cè)器單元等）的任何其他的類(lèi)型，如果流動(dòng)相流量的變化在任何要被分離和滯留的物質(zhì)的擴(kuò)散會(huì)導(dǎo)致擴(kuò)大的峰，柱效降低顯著高性能液相色譜檢測(cè)器的靈敏度是小于在氣相色譜儀中。

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5.分離純化常用的色譜分離方法有哪些

1、色譜方法根據(jù)分離機(jī)制的不同可分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、凝膠過(guò)濾（分子篩）色譜和親和色譜等.2、（1）吸附色譜法是指混合物隨流動(dòng)相通過(guò)吸附劑時(shí)，由于該吸附劑對(duì)不同物質(zhì)有不同的吸附力而使混合物分離的方法.（2）分配色譜系法是利用固定相與流動(dòng)相之間對(duì)待分離組分溶解度的差異來(lái)實(shí)現(xiàn)分離.（3）離子交換色譜法是利用離子交換原理和液相色譜技術(shù)的結(jié)合來(lái)測(cè)定溶液中陽(yáng)離子和陰離子的一種分離分析方法.凡在溶液中能夠電離的物質(zhì)通常都可以用離子交換色譜法進(jìn)行分離.（4）凝膠色譜法又叫凝膠色譜技術(shù)，是六十年代初發(fā)展起來(lái)的一種快速而又簡(jiǎn)單的分離分析技術(shù)，由于設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便，不需要有機(jī)溶劑，對(duì)高分子物質(zhì)有很高的分離效果.（5）親和色譜法是將相互間具有高度特異親和性的二種物質(zhì)之一作為固定相，利用與固定相不同程度的親和性，使成分與雜質(zhì)分離的色譜法.。

6.色譜分析中常用的分析方法有哪些

環(huán)境監(jiān)測(cè)中常用到的色譜分析方法有： 氣相色 譜法、高效液相色譜法、離子色譜法。

環(huán)境監(jiān)測(cè)是通過(guò)對(duì)人類(lèi)和環(huán)境有影響的各種物質(zhì)的含量、排放量的檢測(cè)，跟蹤環(huán)境質(zhì)量的變化，確定環(huán)境質(zhì)量水平，為環(huán)境管理、污染治理等工作提供基礎(chǔ)和保證。簡(jiǎn)單地說(shuō)，了解環(huán)境水平，進(jìn)行環(huán)境監(jiān)測(cè)，是開(kāi)展一切環(huán)境工作的前提。

環(huán)境監(jiān)測(cè)通常包括背景調(diào)查、確定方案、優(yōu)化布點(diǎn)、現(xiàn)場(chǎng)采樣、樣品運(yùn)送、實(shí)驗(yàn)分析、數(shù)據(jù)收集、分析綜合等過(guò)程?？偟膩?lái)說(shuō)，就是計(jì)劃-采樣-分析-綜合的獲得信息的過(guò)程。

7.常用的層析分析方法有哪些

在分離分析特別是蛋白質(zhì)分離分析中，層析是相當(dāng)重要、且相當(dāng)常見(jiàn)的一種技術(shù)，其原理較為復(fù)雜，對(duì)人員的要求相對(duì)較高，這里只能做一個(gè)相對(duì)簡(jiǎn)單的介紹。

一、吸附層析 1、吸附柱層析 吸附柱層析是以固體吸附劑為固定相，以有機(jī)溶劑或緩沖液為流動(dòng)相構(gòu)成柱的一種層析方法。 2、薄層層析 薄層層析是以涂布于玻板或滌綸片等載體上的基質(zhì)為固定相，以液體為流動(dòng)相的一種層析方法。

這種層析方法是把吸附劑等物質(zhì)涂布于載體上形成薄層，然后按紙層析操作進(jìn)行展層。 3、聚酰胺薄膜層析 聚酰胺對(duì)極性物質(zhì)的吸附作用是由于它能和被分離物之間形成氫鍵。

這種氫鍵的強(qiáng)弱就決定了被分離物與聚酰胺薄膜之間吸附能力的大小。層析時(shí)，展層劑與被分離物在聚酰胺膜表面競(jìng)爭(zhēng)形成氫鍵。

因此選擇適當(dāng)?shù)恼箤觿┦狗蛛x在聚酰胺膜表面發(fā)生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的連續(xù)過(guò)程，就能導(dǎo)致分離物質(zhì)達(dá)到分離目的。 常用的層析分析方法，登錄生物幫看看。

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