衍生化方法都(衍生化方法的分類)
1.衍生化方法的分類
分衍生化常用的反應(yīng)有酯化、?；⑼榛?、硅烷化、硼烷化、環(huán)化和離子化等。
雖然氣相色譜已有許多衍生化方法，但它有一個(gè)致命的缺點(diǎn)是不能用于熱不穩(wěn)定化合物。此外，對(duì)于一些有復(fù)雜基質(zhì)的實(shí)際樣品，除分離上的困難外，還容易污染進(jìn)樣器和損壞柱子。
衍生化反應(yīng)從是否形成共價(jià)鍵來說，可分為兩種：標(biāo)記和非標(biāo)記反應(yīng)。標(biāo)記反應(yīng)是在反應(yīng)過程中，被分析物與標(biāo)記試劑之間生成共價(jià)鍵；所有其它類型的反應(yīng)，如形成離子對(duì)、光解、氧化還原、電化學(xué)反應(yīng)等都是非標(biāo)記反應(yīng)。
另一種區(qū)分衍生化反應(yīng)是從衍生反應(yīng)的場(chǎng)所來分，有柱前衍生化（pre-columnderivatization），柱上衍生化（on-columnderivatization）和柱后衍生化（post-columnderivatization）三種。從是否與儀器聯(lián)機(jī)的角度來分有：在線（on-line）、離線（off-1ine）和旁線（at-line）（自動(dòng)化）三種。
目前在HPLC中以離線的柱前衍生法（簡(jiǎn)稱柱前衍生法）與在線的柱后衍生法（簡(jiǎn)稱柱后衍生法）使用居多，旁線衍生化方法是發(fā)展方向。柱前衍生法和柱后衍生法各有其優(yōu)缺點(diǎn)。
柱前衍生法的優(yōu)點(diǎn)是：相對(duì)自由地選擇反應(yīng)條件；不存在反應(yīng)動(dòng)力學(xué)的限制；衍生化的副產(chǎn)物可進(jìn)行預(yù)處理以降低或消除其干擾；容易允許多步反應(yīng)的進(jìn)行；有較多的衍生化試劑可選擇；不需要復(fù)雜的儀器設(shè)備。缺點(diǎn)是：形成的副產(chǎn)物可能對(duì)色譜分離造成較大困難；在衍生化過程中，容易引入雜質(zhì)或干擾峰，或使樣品損失。
柱后衍生法的優(yōu)點(diǎn)有：（1）形成副產(chǎn)物不重要，反應(yīng)不需要完全，產(chǎn)物也不需要高的穩(wěn)定性，只需要有好的重復(fù)性即可；（2）被分析物可以在其原有的形式下進(jìn)行分離，容易選用已有的分析方法。缺點(diǎn)是：（1）對(duì)于一定的溶劑和有限的反應(yīng)時(shí)間來說，目前只有有限的反應(yīng)可供選擇；（2）需要額外的設(shè)備，反應(yīng)器可造成峰展寬，降低分辨率。
2.氣相色譜分析中常用哪些衍生化法
1.硅烷化衍生化方法 硅烷化衍生化方法是氣相色譜樣品處理中應(yīng)用最多的方法，它是利用質(zhì)子性化合物（如醇，酚，酸，胺，硫醇等）與硅烷化試劑反應(yīng)，形成揮發(fā)性的硅烷衍生物。
硅烷化反應(yīng)一般在數(shù)分鐘內(nèi)即可完成。 能進(jìn)行硅烷化的化合物反應(yīng)活性一般為：醇>酚>羧酸>胺>酰胺，反應(yīng)活性還受空間位阻的影響，其醇的反應(yīng)活性為伯醇>仲醇>叔醇，胺的反應(yīng)活性為：伯胺>仲胺。
2. 酯化衍生化方法 有機(jī)酸由于極性較強(qiáng)，易產(chǎn)生嚴(yán)重的拖尾現(xiàn)象，而且大多數(shù)有機(jī)酸揮發(fā)性差，熱穩(wěn)定性也較低。因此，許多有機(jī)酸（特別是長(zhǎng)碳鏈的有機(jī)酸）在進(jìn)行氣相色譜分析之前都要衍生為相應(yīng)的酯。
常用的酯化方法有以下一些。 （1）甲醇法。
有機(jī)酸與甲醇在催化劑的存在下加熱，可以發(fā)生酯化反應(yīng)，生成有機(jī)酸的甲酯。當(dāng)催化劑使用H2SO4、HCl時(shí)，需要回流，反應(yīng)時(shí)間較長(zhǎng)。
若用三氟化硼作催化劑，反應(yīng)可在室溫下完成，通常是將三氟化硼通入甲醇中配制酯化劑，然后再進(jìn)行酯化反應(yīng)。 （2）重氮甲烷法。
重氮甲烷可與有機(jī)酸反應(yīng)，生成有機(jī)酸的甲酯，放出氮?dú)狻?此方法簡(jiǎn)便有效，反應(yīng)速度快，轉(zhuǎn)化率高，很少有副反應(yīng)，不引入雜質(zhì)，但反應(yīng)要在非水介質(zhì)中進(jìn)行。
反應(yīng)條件雖溫和，但重氮甲烷不穩(wěn)定，有爆炸性，有毒（致癌），制備和使用時(shí)要特別小心。常溫下酚羥基可與重氮甲烷緩慢反應(yīng)，但在0℃以下時(shí)可避免酚羥基反應(yīng)。
（3）三氟乙酸酐法。在三氟乙酸酐的存在下有機(jī)酸和酸可以反應(yīng)生成酯。
此法特別適于空間位阻較大的有機(jī)酸和醇或酚的酯化。 （4）其他酯化方法。
為了提高方法的靈敏度和選擇性，有時(shí)需要制備甲酯以外的酯，這些酯化方法有的類似于甲酯化反應(yīng)，如以重氮乙烷、重氮丙烷、重氮甲苯代替重氮甲烷，可制得相應(yīng)的酯。而且這些試劑穩(wěn)定性好、爆炸性小。
用BF3的丙醇、丁醇或戊醇溶液與有機(jī)酸反應(yīng)，也可制備相應(yīng)的丙酯、丁酯或戊酯。 3. ?；苌椒??；芙档土u基、氨基、巰基的極性，改善這些化合物的色譜性能（減少峰的拖尾），并能提高這些化合物的揮發(fā)性，也能增加某些易氧化化合物（如兒茶酚胺）的穩(wěn)定性。
當(dāng)?；瘯r(shí)引入含有鹵離子的?；鶗r(shí)，還可提高使用電子捕獲檢測(cè)器（ECD）的靈敏度。常用的酰化試劑有酰鹵、酸酐和反應(yīng)活性的?；铮ㄈ缫宜徇溥颍?。
常用的酰化方法有以下一些。 （1）乙?；?。
標(biāo)準(zhǔn)的乙酰化法是將樣品溶于氯仿（5ml）中，與0.5ml 乙酸酐和1ml乙酸在5℃反應(yīng)2-6h，真空除去剩余試劑。還可以乙酸鈉為堿性催化劑，以乙酸酐為乙酰化試劑進(jìn)行乙?；磻?yīng)，用于糖類的分析。
吡啶、三乙胺、甲基咪唑等也可作為堿性催化劑。乙?；磻?yīng)通常在非水介質(zhì)中進(jìn)行，但胺類和酚類化合物乙?；瘯r(shí)可在水溶液中進(jìn)行。
（2）多氟?；ā３Ｓ玫亩喾；噭┦侨阴＃═FA），五氟丙酰（PFP）和七氟丁酰（HFB），其反應(yīng)活性是TFA>PFP>HFB。
TFA和PFP的衍生物揮發(fā)性較強(qiáng)，而HFP的衍生物ECD靈敏度高。多氟酰化反應(yīng)的時(shí)間除取決于多氟?；噭┑幕钚酝?，還取決于目標(biāo)化合物的活性。
如：麻黃堿和偽麻黃堿及其同系物與三氟乙酸酐（TFAA）在60℃時(shí)5min可完成反應(yīng)：三環(huán)類抗抑郁藥物與七氟乙酸酐（HFBA）在60℃時(shí)10min 可完成反應(yīng)：而哌可酸，脯氨酸，谷氨酸，γ - 氨基丁酸的甲酯與HFBA的反應(yīng)需在120℃時(shí)+20min 完成。多數(shù)情況氟酰化反應(yīng)不需溶劑，但也有些需在溶劑中進(jìn)行。
此外，有時(shí)還需加堿性催化劑。如胺和酸的多氟?；Ｒ员綖槿軇?，三乙胺為催化劑；糖類的三氟乙?；窃谌燃淄槿軇┲校赃拎榇呋瘎┻M(jìn)行的。
4. 鹵化衍生化方法 在目標(biāo)化合物中引入鹵原子后可使用ECD檢測(cè)器，提高檢測(cè)的靈敏度（降低檢測(cè)限），同時(shí)也可改善揮發(fā)性和穩(wěn)定性，常用的鹵化衍生化方法有以下一些。 （1）鹵素法。
用鹵素直接作為衍生化試劑處理樣品，鹵素的作用是加成或取代。 （2）鹵化氫法。
常用HCl和HBr為衍生化試劑與不飽和鏈發(fā)生加成反應(yīng)或與羥基發(fā)生置換反應(yīng)。 （3）N - 溴代丁二酰亞胺（NBS 法）。
NBS是選擇性很強(qiáng)的鹵化衍生試劑，可使烯丙位的氫原子發(fā)生溴代反應(yīng)。
3.氣相色譜分析中常用哪些衍生化法
1.硅烷化衍生化方法
硅烷化衍生化方法是氣相色譜樣品處理中應(yīng)用最多的方法，它是利用質(zhì)子性化合物（如醇，酚，酸，胺，硫醇等）與硅烷化試劑反應(yīng)，形成揮發(fā)性的硅烷衍生物。硅烷化反應(yīng)一般在數(shù)分鐘內(nèi)即可完成。
能進(jìn)行硅烷化的化合物反應(yīng)活性一般為：醇>；酚>；羧酸>；胺>；酰胺，反應(yīng)活性還受空間位阻的影響，其醇的反應(yīng)活性為伯醇>；仲醇>；叔醇，胺的反應(yīng)活性為：伯胺>；仲胺。
2. 酯化衍生化方法
有機(jī)酸由于極性較強(qiáng)，易產(chǎn)生嚴(yán)重的拖尾現(xiàn)象，而且大多數(shù)有機(jī)酸揮發(fā)性差，熱穩(wěn)定性也較低。因此，許多有機(jī)酸（特別是長(zhǎng)碳鏈的有機(jī)酸）在進(jìn)行氣相色譜分析之前都要衍生為相應(yīng)的酯。常用的酯化方法有以下一些。
(1)甲醇法。有機(jī)酸與甲醇在催化劑的存在下加熱，可以發(fā)生酯化反應(yīng)，生成有機(jī)酸的甲酯。當(dāng)催化劑使用H2SO4、HCl時(shí)，需要回流，反應(yīng)時(shí)間較長(zhǎng)。若用三氟化硼作催化劑，反應(yīng)可在室溫下完成，通常是將三氟化硼通入甲醇中配制酯化劑，然后再進(jìn)行酯化反應(yīng)。
(2)重氮甲烷法。重氮甲烷可與有機(jī)酸反應(yīng)，生成有機(jī)酸的甲酯，放出氮?dú)狻?/p>
此方法簡(jiǎn)便有效，反應(yīng)速度快，轉(zhuǎn)化率高，很少有副反應(yīng)，不引入雜質(zhì)，但反應(yīng)要在非水介質(zhì)中進(jìn)行。反應(yīng)條件雖溫和，但重氮甲烷不穩(wěn)定，有爆炸性，有毒（致癌），制備和使用時(shí)要特別小心。常溫下酚羥基可與重氮甲烷緩慢反應(yīng)，但在0℃以下時(shí)可避免酚羥基反應(yīng)。
(3)三氟乙酸酐法。在三氟乙酸酐的存在下有機(jī)酸和酸可以反應(yīng)生成酯。此法特別適于空間位阻較大的有機(jī)酸和醇或酚的酯化。
(4)其他酯化方法。為了提高方法的靈敏度和選擇性，有時(shí)需要制備甲酯以外的酯，這些酯化方法有的類似于甲酯化反應(yīng)，如以重氮乙烷、重氮丙烷、重氮甲苯代替重氮甲烷，可制得相應(yīng)的酯。而且這些試劑穩(wěn)定性好、爆炸性小。用BF3的丙醇、丁醇或戊醇溶液與有機(jī)酸反應(yīng)，也可制備相應(yīng)的丙酯、丁酯或戊酯。
3. ?；苌椒?/p>
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常用的?；椒ㄓ幸韵乱恍?。
(1)乙酰化法。標(biāo)準(zhǔn)的乙?；ㄊ菍悠啡苡诼确拢?ml）中，與0.5ml 乙酸酐和1ml乙酸在5℃反應(yīng)2-6h，真空除去剩余試劑。還可以乙酸鈉為堿性催化劑，以乙酸酐為乙?；噭┻M(jìn)行乙酰化反應(yīng)，用于糖類的分析。吡啶、三乙胺、甲基咪唑等也可作為堿性催化劑。乙酰化反應(yīng)通常在非水介質(zhì)中進(jìn)行，但胺類和酚類化合物乙?；瘯r(shí)可在水溶液中進(jìn)行。
(2)多氟酰化法。常用的多氟?；噭┦侨阴＃═FA），五氟丙酰（PFP）和七氟丁酰（HFB），其反應(yīng)活性是TFA>PFP>HFB。TFA和PFP的衍生物揮發(fā)性較強(qiáng)，而HFP的衍生物ECD靈敏度高。多氟?；磻?yīng)的時(shí)間除取決于多氟酰化試劑的活性外，還取決于目標(biāo)化合物的活性。如：麻黃堿和偽麻黃堿及其同系物與三氟乙酸酐（TFAA）在60℃時(shí)5min可完成反應(yīng)：三環(huán)類抗抑郁藥物與七氟乙酸酐（HFBA）在60℃時(shí)10min 可完成反應(yīng)：而哌可酸，脯氨酸，谷氨酸，γ - 氨基丁酸的甲酯與HFBA的反應(yīng)需在120℃時(shí)+20min 完成。多數(shù)情況氟?；磻?yīng)不需溶劑，但也有些需在溶劑中進(jìn)行。此外，有時(shí)還需加堿性催化劑。如胺和酸的多氟酰化常以苯為溶劑，三乙胺為催化劑；糖類的三氟乙?；窃谌燃淄槿軇┲校赃拎榇呋瘎┻M(jìn)行的。
4. 鹵化衍生化方法
在目標(biāo)化合物中引入鹵原子后可使用ECD檢測(cè)器，提高檢測(cè)的靈敏度（降低檢測(cè)限），同時(shí)也可改善揮發(fā)性和穩(wěn)定性，常用的鹵化衍生化方法有以下一些。
(1)鹵素法。用鹵素直接作為衍生化試劑處理樣品，鹵素的作用是加成或取代。
(2)鹵化氫法。常用HCl和HBr為衍生化試劑與不飽和鏈發(fā)生加成反應(yīng)或與羥基發(fā)生置換反應(yīng)。
(3)N - 溴代丁二酰亞胺（NBS 法）。NBS是選擇性很強(qiáng)的鹵化衍生試劑，可使烯丙位的氫原子發(fā)生溴代反應(yīng)。
4.衍生化方法的應(yīng)用實(shí)例
(1)硅烷化柱前衍生氣相色譜法測(cè)定氯霉素殘留：樣品經(jīng)提取，濃縮凈化、微氮吹干后，加入100μL硅烷化試劑，經(jīng)60℃30min反應(yīng)。氯霉素的沸點(diǎn)降至可供氣相色譜或氣質(zhì)聯(lián)用儀分析用。采用DB-35MS(30m*0.25mm*0.25µm)色譜柱。
(2)氧化鉛后柱衍生—HPLC法測(cè)定孔雀石綠殘留：孔雀石綠（malachite green,MG）屬于三苯甲烷類染料。無色的母體形式（leuco malachite green,LMG）是孔雀石綠在魚體及其他生物體內(nèi)的主要代謝產(chǎn)物和存在形式，在檢測(cè)孔雀石綠在魚體內(nèi)的殘留，應(yīng)同時(shí)檢測(cè)MG與LMG。采用C18柱色譜柱（250*4.6mm I.D.,5μm）和Celite 545氧化鉛后柱（純PbO2(1:1),20mm*2.1mm I.D）。結(jié)果在MG、LMG與結(jié)晶紫（GV）、母體結(jié)晶紫同時(shí)檢測(cè)時(shí)，保留時(shí)間分別為：MG 8.33min、GV 14.18min、LMG 18.19min和19.84min。使用氧化鉛后柱衍生—HPLC法測(cè)定孔雀石綠殘留，具有分離效率高、快速、重現(xiàn)性好、儀器設(shè)備簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，是MG、LMG檢測(cè)中最常用的方法。
5.衍生化方法的分類
分衍生化常用的反應(yīng)有酯化、?；?、烷基化、硅烷化、硼烷化、環(huán)化和離子化等。雖然氣相色譜已有許多衍生化方法，但它有一個(gè)致命的缺點(diǎn)是不能用于熱不穩(wěn)定化合物。此外，對(duì)于一些有復(fù)雜基質(zhì)的實(shí)際樣品，除分離上的困難外，還容易污染進(jìn)樣器和損壞柱子。
衍生化反應(yīng)從是否形成共價(jià)鍵來說，可分為兩種：標(biāo)記和非標(biāo)記反應(yīng)。標(biāo)記反應(yīng)是在反應(yīng)過程中，被分析物與標(biāo)記試劑之間生成共價(jià)鍵；所有其它類型的反應(yīng)，如形成離子對(duì)、光解、氧化還原、電化學(xué)反應(yīng)等都是非標(biāo)記反應(yīng)。另一種區(qū)分衍生化反應(yīng)是從衍生反應(yīng)的場(chǎng)所來分，有柱前衍生化（pre-columnderivatization），柱上衍生化（on-columnderivatization）和柱后衍生化（post-columnderivatization）三種。從是否與儀器聯(lián)機(jī)的角度來分有：在線（on-line）、離線（off-1ine）和旁線（at-line）（自動(dòng)化）三種。目前在HPLC中以離線的柱前衍生法（簡(jiǎn)稱柱前衍生法）與在線的柱后衍生法（簡(jiǎn)稱柱后衍生法）使用居多，旁線衍生化方法是發(fā)展方向。
柱前衍生法和柱后衍生法各有其優(yōu)缺點(diǎn)。柱前衍生法的優(yōu)點(diǎn)是：相對(duì)自由地選擇反應(yīng)條件；不存在反應(yīng)動(dòng)力學(xué)的限制；衍生化的副產(chǎn)物可進(jìn)行預(yù)處理以降低或消除其干擾；容易允許多步反應(yīng)的進(jìn)行；有較多的衍生化試劑可選擇；不需要復(fù)雜的儀器設(shè)備。缺點(diǎn)是：形成的副產(chǎn)物可能對(duì)色譜分離造成較大困難；在衍生化過程中，容易引入雜質(zhì)或干擾峰，或使樣品損失。柱后衍生法的優(yōu)點(diǎn)有：（1）形成副產(chǎn)物不重要，反應(yīng)不需要完全，產(chǎn)物也不需要高的穩(wěn)定性，只需要有好的重復(fù)性即可；（2）被分析物可以在其原有的形式下進(jìn)行分離，容易選用已有的分析方法。缺點(diǎn)是：（1）對(duì)于一定的溶劑和有限的反應(yīng)時(shí)間來說，目前只有有限的反應(yīng)可供選擇；（2）需要額外的設(shè)備，反應(yīng)器可造成峰展寬，降低分辨率。
6.衍生化方法的生化試劑
衍生化試劑很多，簡(jiǎn)單的說：它能幫你將不能分析的樣品通過衍生化試劑反應(yīng)轉(zhuǎn)化為可分析的化合物.衍生化試劑比如有：烷基化試劑、硅烷化試劑、?；噭╊悺晒庋苌噭?、紫外衍生化試劑、苯甲酰氯衍生化試劑、羥基衍生化試劑 、手性衍生化試劑、氨基衍生化試劑、氣相色譜和液相色譜中常用的柱前衍生化方法、固相化學(xué)衍生化法。
高效液相色譜法有甲醛與2,4-二硝基苯肼（DNPH）反應(yīng)生成腙，衍生化產(chǎn)物醛腙用有機(jī)溶劑萃取富集后，在一定溫度下蒸發(fā)、濃縮，再以甲醇或乙腈溶解或稀釋，最后進(jìn)行色譜測(cè)定。雖然已有許多的衍生化試劑被使用，但是目前開發(fā)新的衍生化試劑仍然是一個(gè)活躍的研究領(lǐng)域，其主要目的是不斷提高靈敏度和選擇性以及擴(kuò)大應(yīng)用范圍。
衍生化試劑要求：①衍生劑必須過量且穩(wěn)定；不過量反應(yīng)不完全，檢測(cè)不充分。不穩(wěn)定，重現(xiàn)性差；②衍生物、衍生產(chǎn)物和衍生副產(chǎn)物至少是好分離的。
當(dāng)然如果只能檢測(cè)到衍生產(chǎn)物最好；③衍生反快速完全。反應(yīng)慢，柱前衍生還可以，但柱后不行。
因?yàn)榱魉俟潭?，衍生池管路長(zhǎng)度一定，留給衍生化的時(shí)間是一定的。柱前衍生可以在系統(tǒng)外等衍生完畢后進(jìn)樣，但也是影響效率的。
硅烷基指三甲基硅烷Si(CH3)3或稱TMS。硅烷化作用是指將硅烷基引入到分了中，一般是取代活性氫。
活性氫被硅烷基取代后降低了化合物的極性，減少了氫鍵束縛。因此所形成的硅烷化衍生物更容易揮發(fā)。
同時(shí)，由于含活性氫的反應(yīng)位點(diǎn)數(shù)目減少，化合物的穩(wěn)定性也得以加強(qiáng)。硅烷化化合物極性減弱，被測(cè)能力增強(qiáng)，熱穩(wěn)定性提高。
硅烷化在GC分析中用途最大。許多被認(rèn)為是不揮發(fā)性的或是在200~300℃熱不穩(wěn)定的羥基化合物經(jīng)過硅烷化后成功的進(jìn)行色譜分析。
硅烷化試劑作用同時(shí)受到溶劑系統(tǒng)和添加的催化劑的影響。催化劑的使用（如三甲基氯硅烷，吡啶）可加快硅烷化試劑的反應(yīng)。
確定好硅烷化反應(yīng)的時(shí)間和溫度至關(guān)重要。必須知道衍生化的轉(zhuǎn)化速率，以實(shí)現(xiàn)對(duì)未知樣品的定最分析。
硅烷化試劑一般都對(duì)潮氣敏感，應(yīng)密封保存以防止其吸潮失效。這些硅烷化試劑適用于范圍較廣，但如果使用過最，則可能給火焰離子化檢測(cè)器造成些麻煩。
三甲基硅烷是GC分析最常用的通用硅烷化基團(tuán)。引入此基團(tuán)可改善色譜分離，并使得特殊檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用成為可能。
硅烷化試劑還可以用于對(duì)玻璃器具（如GC的內(nèi)襯管）和色譜的擔(dān)體進(jìn)行去活化。硅烷化試劑主要是（氯）甲基硅烷系列。
見下：雙（三甲基硅烷基）乙酰胺——（BSA）N,O-二（三甲基硅烷）乙酰胺——（BSA）雙（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺——（BSTFA）二甲基二氧硅烷——（DMDCS）六甲基二硅胺——（HMDS）1,1,1,3,3,3六甲基硅氮烷——（HMDS）N-（叔丁基二甲基硅烷基）-N-甲基三氟乙酰胺——（MTBSTFA）N-甲基三氟乙酰胺——（MTBSTFA）三氟乙酸——（TFA）三甲基氯硅烷——（TMCS）三甲基硅烷咪唑——（TMSI）二甲基二氯硅烷——（DMDCS）N-甲基-n-（三甲基硅烷）三氟乙酰胺（MSTFA） ?；饔米鳛楣柰榛拇娣椒?，可通過羧酸或共衍生物的作用將含有活潑氫合物（如-OH、-SH、-NH）轉(zhuǎn)化為酯、硫酯或酰胺。含有鹵離了的羰基基團(tuán)可增強(qiáng)電了捕獲檢測(cè)器酞化作用具有很多優(yōu)點(diǎn)：保護(hù)不穩(wěn)定基團(tuán)，從而增加了化合物的穩(wěn)定性；可提高如糖類，氨基酸等物質(zhì)的揮發(fā)性。
這些物質(zhì)常帶有大量的極性官能團(tuán)，加熱時(shí)易分解；有助于混合物的分離；使用ECD檢測(cè)，分析物檢測(cè)下限可降低很多。常用的?；噭┯校阂宜狒ˋA）、三氟乙酸酐（TFAA）、五氟丙酸酐（PFPA）、七氟丁酸酐（HFBA）、N-甲基雙（三氟乙酸酐）咪唑（MBTFA）、1-（三氟乙酰）咪唑（TFAI）等。
烷基化作用是將烷基官能團(tuán)（脂肪族或脂肪，芳香族）添加到活性官能團(tuán)（H）上。以烷基基團(tuán)代替氫的重要性在于生成的衍生物與原來化合物相比極性大為下降。
該試劑常用于修飾改良含有酸性氫的化合物如羧酸和苯酚。生成的產(chǎn)物有醚，酯，硫醚，硫酯，正烷基胺和正烷基酰胺。
弱酸性官能團(tuán)（如醇）的烷基化要求有強(qiáng)堿催化劑（氫氧化鈉，氫氧化鉀）。酸性稍強(qiáng)的OH基團(tuán)如苯酚和羧酸，弱堿催化劑（氯化氫，三氟化硼）即可。
常用的烷基化試劑有重氮甲烷、2,2二甲基丙烷（DMP）、18-冠醚-6、硼酸正丁酯（NBB）、O-鹽酸甲氧基胺、五氟芐基溴（PFBBr）、N-甲基-N-亞硝基對(duì)甲苯磺酰胺（Diazald）、N,N-二甲基甲酰胺二縮叔乙醛（DMF-DBA）、N,N-二甲基甲酰胺二縮乙醛（DMF-DEA）、N,N-二甲基甲酰胺二縮甲醛（DMF-DMA）、N,N-二甲基甲酰胺二縮丙醛（DMF-DPA）、1-甲基-3-硝基-1-亞硝基胍（MNNG,97%） 、三甲基苯胺——（TMAH）等。 常用紫外衍生化試劑⑴2,4-二硝基氟苯（最大吸收波長(zhǎng)350nm，摩爾吸收系數(shù)>104）⑵對(duì)硝基苯甲酰氯（最大吸收波長(zhǎng)254nm，摩爾吸收系數(shù)>104）⑶ 對(duì)甲基苯磺酰氯（最大吸收波長(zhǎng)224nm，摩爾吸收系數(shù)=104）⑷異硫氰酸苯酯（最大吸收波長(zhǎng)244nm，摩爾吸收系數(shù)=104）⑸ 對(duì)硝基苯基溴（最大吸收波長(zhǎng)265nm，摩爾吸收系數(shù)6200 ）⑹ 對(duì)溴代苯甲酰甲基溴（最大吸收波長(zhǎng)260nm，摩爾吸收系數(shù)=1.8*104）⑺ 萘酰甲基溴（。
