2.6一二氯酚靛酚滴定法測定還原型抗壞血酸是多年采用的經(jīng)典方法。該法簡便易行、快速,目前仍被廣泛運用。但此方法尚存著一定均缺點,突出的一點是滴定終點難以確定。利用2.6一二氯酚靛酚滴定含有抗壞血酸的酸性物質(zhì)溶液而當抗壞血酸尚未被全部被氧化時,滴下的2.6一二氮酚靛酚立即被還原成無色。而溶液中的坑壞血酸一旦被氧化,則滴入的2.6一二氮酚靛酚則立即使溶液呈現(xiàn)紅色。所以,當溶液從無色轉(zhuǎn)變成微紅色時,即表示溶液中的抗壞血酸剛剛
被全部氧化,此時為滴定終點。此種方法對于無色或淡黃色、綠色樣品液的滴定終點易確定,而對于山植、大棗、草葺、酸棗等紫色、粉紅或褐色等色澤的朵蔬樣品液的滴定終點就難以觀察確定。為此,往往經(jīng)稀釋,添加活性炭、白陶土來進行脫色處理,添加維生素C的方法來解決。既使如此,仍難得到滿意的結(jié)果,測定數(shù)據(jù)也很難準確。為克服以上缺點,近年來經(jīng)反復多次的實驗研究,采用2.6一二氯酚靛酚反滴定法測果蔬中還原抗壞血酸,終于摸索出比較合理的實
驗條件,收到了比較滿意的效果。
維生素C不同的測定方法 目前研究維生素C測定方法的報道較多,有關(guān)維生素C的測定方法如熒光法、2,6-二氯靛酚滴定法、2,4-二硝基苯肼法、光度分析法、化學發(fā)光法、電化學分析法及色譜法等,各種方法對實際樣品的測定均有滿意的效果. 為了解國內(nèi)VC含量測定方法及其應用方面的現(xiàn)狀及發(fā)展態(tài)勢.方法以"維生素C或抗壞血酸和測定"為檢索詞對1994~2002年中國期刊網(wǎng)全文數(shù)據(jù)庫(CNKI)中的理工A、B和醫(yī)藥衛(wèi)生專輯進行篇名檢索,對所得有關(guān)維生素C含量測定的文獻數(shù)據(jù)分別以年代、作者區(qū)域、載刊等級、樣品類型、測定方法等進行計量分析.結(jié)果核心期刊載刊文獻占文獻總量的45.06%,其中光度法占65.69%,電化法占18.63%,色譜法占12.75%;復雜被測樣品文獻占文獻總量的45.06%,其中光度法占60.92%,色譜法占19.54%,電化法占10.34%.結(jié)論目前國內(nèi)維生素C含量測定仍以光度法為主流,但近年來色譜法,特別是HPLC法上升趨勢尤為明顯. 一.熒光法 1.原理 樣品中還原型抗壞血酸經(jīng)活性炭氧化成脫氫型抗壞血酸后,與鄰苯二胺(OPDA)反應生成具有熒光的喹喔啉(quinoxaline),其熒光強度與脫氫抗壞血酸的濃度在一定條件下成正比,以此測定食物中抗壞血酸和脫氫抗壞血酸的總量。
脫氫抗壞血酸與硼酸可形成復合物而不與OPDA反應,以此排除樣品中熒光雜質(zhì)所產(chǎn)生的干擾。本方法的最小檢出限為0.022 g/ml。
2.適用范圍 本方法適用于蔬菜、水果及其制品中總抗壞血酸的測定 3. 注意事項 3.1 大多數(shù)植物組織內(nèi)含有一種能破壞抗壞血酸的氧化酶,因此,抗壞血酸的測定應采用新鮮樣品并盡快用偏磷酸-醋酸提取液將樣品制成勻漿以保存維生C。 3.2 某些果膠含量高的樣品不易過濾,可采用抽濾的方法,也可先離心,再取上清液過濾。
3.3活性炭可將抗壞血酸氧化為脫氫抗壞血酸,但它也有吸附抗壞血酸的作用,故活性炭用量應適當與準確,所以,應用天平稱量。我們的實驗結(jié)果證明,用2g活性炭能使測定樣品中還原型抗壞血酸完全氧化為脫氫型,其吸附影響不明顯。
二、2,6-二氯靛酚滴定法(還原型VC) 1、原理: 還原型抗壞血酸還原染料2,6-二氯靛酚,該染料在酸性中呈紅色,被還原后紅色消失。還原型抗壞血酸還原2,6-二氯靛酚后,本身被氧化成脫氫抗壞血酸。
在沒有雜質(zhì)干擾時,一定量的樣品提取液還原標準2,6-二氯靛酚的量與樣品中所含維生素C的量成正比。本法用于測定還原型抗壞血酸,總抗壞血酸的量常用2,4-二硝基苯肼法和熒光分光光度法測定。
2、注意事項 ⑴ 所有試劑的配制最好都用重蒸餾水; ⑵ 滴定時,可同時吸二個樣品。一個滴定,另一個作為觀察顏色變化的參考; ⑶ 樣品進入實驗室后,應浸泡在已知量的2%草酸液中,以防氧化,損失維生素C; ⑷ 貯存過久的罐頭食品,可能含有大量的低鐵離子(Fe2+),要用8%的醋酸代替2%草酸。
這時如用草酸,低鐵離子可以還原2,6-二氯靛酚,使測定數(shù)字增高,使用醋酸可以避免這種情況的發(fā)生; ⑸ 整個操作過程中要迅速,避免還原型抗壞血酸被氧化; ⑹ 在處理各種樣品時,如遇有泡沫產(chǎn)生,可加入數(shù)滴辛醇消除; ⑺ 測定樣液時,需做空白對照,樣液滴定體積扣除空白體積。 3優(yōu)點:它具有簡便、快速、比較準確等優(yōu)點,適用于許多不同類型樣品的分析。
缺點是不能直接測定樣品中的脫氫抗壞血酸及結(jié)合抗壞血酸的含量,易受其他還原物質(zhì)的干擾。如果樣品中含有色素類物質(zhì),將給滴定終點的觀察造成困難。
在酸性環(huán)境中,抗壞血酸(還原型)能將染料2,6—DCIP還原成無色的還原型2,6—DCIP,而抗壞血酸則被氧化成脫氫抗壞血酸。氧化型2,6—DCIP在中性或堿性溶液中呈藍色,但在酸性溶液中則呈粉紅色。
因此,當用2,6—DICP滴定含有抗壞血酸的酸性溶液時,在抗壞血酸未被全部氧化前,滴下的2,6—DCIP 立即被還原成無色,一旦溶液中的抗壞血酸全部被氧化時,則滴下微量過剩的2,6—DCIP 便立即使溶液顯示淡粉紅色或微紅色,此時即為滴定終點,表示溶液中的抗壞血酸剛剛?cè)勘谎趸R罁?jù)滴定時2,6—DCIP 標準溶液的消耗量 (ml),可以計算出被測樣品中抗壞血酸的含量。
氧化型2,6—DCIP與還原型抗壞血酸常在稀草酸或偏磷酸溶液中進行反應。即先將樣品溶于一定濃度的酸性溶液中或經(jīng)抽提后,再用2,6—DCIP標準溶液滴定至終點。
食物和生物材料中常含有其他還原物質(zhì),其中有些還原物質(zhì)可使2,6—DCIP還原脫色。為了消除這些還原物質(zhì)對定量測定的干擾,可用抗壞血酸氧化酶處理,破壞樣品中還原型抗壞血酸后,再用2,6—DCIP 滴定樣品中其他還原物質(zhì)。
然后從滴定未經(jīng)酶處理樣品時2,6—DCIP標準溶液的總消耗量中,減去滴定非抗壞血酸還原物質(zhì)2,6—DCIP 標準溶液的消耗量,即為滴定抗壞血酸實際所消耗的2,6—DCIP標準溶液的體積,由此可以計算出樣品中抗壞血酸的含量。另外,還可利用抗壞血酸和其他還原物質(zhì)與2,6—DCIP反應速度的差別,并通過控制樣品溶液在pH1 — 3 范圍內(nèi),進行快速滴定,可以消除或減少其他還原物質(zhì)的作用,一般在這樣的條件下,干擾物質(zhì)與2,6—DCIP的反應是很慢的或受到抑制。
生物體液(如血液、尿等)中的。
水果中維生素c含量的測定方法有三種,分別為原子吸收分光光度法、紫外可見分光光度法、高效液相色譜法。
1、原子吸收分光光度法
利用原子吸收分光光度法問接測定維生素C的含量,是利用維生素C可以與一些金屬離子發(fā)生氧化還原反應,通過測定反應掉的金屬離子的量,進而間接計算出維生素c的含量。
2、紫外-可見分光光度法
利用紫外-可見分光光度法測定維生素C的含量是基于維生素c在紫外光區(qū)有特征吸收,但是因為維生素C結(jié)構(gòu)中具有不飽和鍵,具有還原性,不易穩(wěn)定存在,直接測定誤差較大。所以在利用紫外分光光度法測定時,維生素標準溶液和待測樣的配制條件非常重要。
3、高效液相色譜法
高效液相色譜法是以液體為流動相,采用高壓輸液系統(tǒng),將維生素C的溶劑裝有固定相的色譜柱,在柱內(nèi)各成分被分離后,進入檢測器進行檢測,從而測量出維生素c的含量。
擴展資料
維生素c含量的測定方法對比:
由于維生素C自身的不穩(wěn)定,導致了很多方法測定結(jié)果誤差較大,所以對維生素C穩(wěn)定存在條件的探索非常重要。高效液相色譜法因為測定較準確、靈敏度高、選擇性好,有較好的發(fā)展前景,是目前發(fā)展較快的一種方法。
參考資料來源:百度百科-維生素c
百度百科-高效液相色譜
百度百科-原子吸收分光光度法
百度百科-紫外-可見分光光度法
維生素A為用1g含270萬單位以上的維生素A醋酸酯結(jié)晶加精致植物油制成的油溶液。維生素A膠丸為取維生素A,加精煉食用植物油(在0℃左右脫去固體脂肪)溶解并調(diào)整濃度后制成。2005版《中國藥典》二部附錄(VII J)收載了其含量測定方法。
文獻報道的方法:
馬莉等用RP-HPLC法測定維生素A的含量。儀器:島津LC-10AT。色譜柱:Huupersil ODS(150mm*4.6mm);流動相為96%甲醇;流速:1.0ml/min;檢測波長:325nm;柱溫:25℃。
黃雙路等用鹽酸溶解維生素A 膠丸的膠殼后,以環(huán)己烷萃取內(nèi)容物,采用紫外分光光度法測定含量,最大吸收峰波長在326~329nm之間。
李枝端等用三點校正法測定維生素A的含量。維生素A醋酸酯測定波長:λ1=316nm,λ2=328nm,λ3=340nm;維生素A醇測定波長:λ1=310nm,λ2=325nm,λ3=334nm。
蔬菜中維生素C的測量
用品:試管、研缽、紗布、西紅柿、黃瓜、淀粉碘酒溶液、氫氧化鈉溶液。
原理:維生素C又叫抗壞血酸,它的第2、3碳位的烯醇結(jié)構(gòu)具有很強的還原性,能把碘原子還原成碘離子,使原來淀粉遇碘所顯示的藍色自行褪去。維生素C在受熱及堿性條件下,易分解破壞。
操作:
1.制備汁液:取新鮮西紅柿、黃瓜各100g,洗凈后在研缽中搗爛,用紗布包住擠出汁液待用。
2.取上述制出的汁液各1mL,分盛兩支試管中,各加6滴淀粉碘酒溶液,發(fā)現(xiàn)顏色變化是:西紅柿汁中藍色褪,黃瓜汁中還有較淺的藍色。
3.取由1制出的汁液各1mL,加熱至沸,并保持沸騰約15min,然后加入淀粉碘酒溶液各6滴,發(fā)現(xiàn)藍色基本保持不變。
4.取由1制出的汁液各1mL,各加氫氧化鈉溶液各6滴,振蕩均勻后,各加淀粉碘酒溶液各6滴,發(fā)現(xiàn)藍色基本保持不變。
結(jié)論:
1.蔬菜中維生素C的含量,是依據(jù)相同實驗條件下藍色的褪色程度來確定,藍色深則含量低,藍色愈淺則含量愈高。
2.蔬菜燒煮時間不能過長,也不能加堿,否則維生素C被破壞。
缺乏維生素A------眼睛干燥,畏光,多淚,視覺模糊,皮膚干粗者,應多服用胡蘿卜,動物肝臟,雞蛋,牛奶,??措娨暸c心血管疾病者也宜多食用
缺乏維生素B1----手腳麻木,氣色不佳,消化不良,患有多發(fā)性神經(jīng)炎和腳氣病者,應多食糙米,赤豆,番茄,花生等
缺乏維生素B2--------換口角炎,舌炎,陰囊炎者,應補充面粉,小米,花生,豆類,肉類,蛋類等
缺乏維生素B3----------失眠,口臭,無原因頭痛,精神倦怠者,補充維生素B3片劑
缺乏維生素B5---------易患皮炎,腹瀉,神經(jīng)炎者,多服牛奶,雞蛋,新鮮蔬菜
缺 乏維生素B12-------食欲不振,記憶力不佳,精神不集中,毛發(fā)稀黃,皮膚蒼白者,多服動物肝臟,酵母
缺乏維生素C--------牙齦腫,口干舌燥,容易感冒,傷口不易愈合者,多服蘿卜,豆芽,山楂等
缺乏維生素D--------頭部多汗,兒童易患佝僂病,成人骨質(zhì)軟化者,多曬太陽。服用魚肝油
缺乏維生素E---------四肢乏力,易出汗,皮膚干燥,頭發(fā)分叉,精神緊張及痛經(jīng)者,多服綠葉蔬菜,植物油
缺乏維生素K-------出血難止,血液難凝者,多服綠葉蔬菜,魚肉
聲明:本網(wǎng)站尊重并保護知識產(chǎn)權(quán),根據(jù)《信息網(wǎng)絡(luò)傳播權(quán)保護條例》,如果我們轉(zhuǎn)載的作品侵犯了您的權(quán)利,請在一個月內(nèi)通知我們,我們會及時刪除。
蜀ICP備2020033479號-4 Copyright ? 2016 學習鳥. 頁面生成時間:2.728秒