聚合酶鏈式反應。是一種酶促化學反應,可以在試管里將待測的目的基因在很短的時間內(nèi)擴增五十萬倍乃至上百萬倍,大大提高了基因診斷的靈敏度,降低了分析的難度。PCR法是目前基因診斷中使用最多的方法。
PCR是聚合酶鏈式反應的簡稱,是一種酶促化學反應,可以在試管里將待測的目的基因在很短的時間內(nèi)擴增五十萬倍乃至上百萬倍,大大提高了基因診斷的靈敏度,降低了分析的難度。PCR法是目前基因診斷中使用最多的方法。
pcr全稱是PolymeraseChainReaction。
PCR是聚合酶鏈式反應的簡稱,是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法,由高溫變性、低溫退火、適溫延伸等反應組成1個周期,循環(huán)進行,使目的DNA得以迅速擴增。PCR是一種將特異DNA片段在短時間內(nèi)進行大批量復制的生物技術,它與克隆有些相似,但又不盡相同。
特點
pcr具有特異性強、靈敏度高、操作簡便、省時等特點,它不僅可用于基因分離克隆和核酸序列分析等基礎研究,還可用于疾病的診斷和任何有DNA和RNA的地方。
盡管PCR功能很強大,但它也具有局限性。它能夠復制的DNA片段的長度是有限制的,不能特別大,從研究者的角度來說,對于擴增長片段的DNA序列,克隆比PCR更有效。另外,被擴增的DNA邊界序列必須已知,否則反應不能正常進行。
以上內(nèi)容參考:百度百科-聚合酶鏈式反應
聚合酶鏈式反應簡稱PCR(英文全稱:Polymerase Chain Reaction)
是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法,由高溫變性、低溫退火及適溫延伸等幾步反應組成一個周期,循環(huán)進行,使目的DNA得以迅速擴增,具有特異性強、靈敏度高、操作簡便、省時等特點.它不僅可用于基因分離、克隆和核酸序列分析等基礎研究,還可用于疾病的診斷或任何有DNA,RNA的地方.聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction,簡稱PCR)又稱無細胞分子克隆或特異性DNA序列體外引物定向酶促擴增技術.
你好,以下內(nèi)容來源于維基百科。
聚合酶鏈鎖反應,Polymerase chain reaction,簡稱PCR,是一種分子生物學技術,用于擴增特定的DNA片段,這種方法可在生物體外進行,不必依賴大腸桿菌或酵母菌等生物體。PCR這項技術,被廣泛地運用在醫(yī)學和生物學的實驗室,例如用于判斷檢體中是否會表現(xiàn)某遺傳疾病的圖譜、傳染病的診斷、和克隆基因,以及親子鑒定。
PCR這項技術是由凱利·穆利斯(Kary Mullis)發(fā)明,并因此在七年之后,1993年10月,獲得了諾貝爾化學獎該項殊榮。穆利斯的想法是,利用一種人工方法,和反復相同程序的方法,并利用一種特殊的酶——即DNA聚合酶來擴增特定的DNA片段。
DNA聚合酶天然存在于生物體內(nèi),在細胞分裂前進行DNA的復制。當DNA開始復制時,解旋酶將雙股的DNA分開成兩個單股。DNA聚合酶便結合在兩DNA單股鏈上,生成互補鏈。在穆利斯最初的PCR反應中,將DNA聚合酶用于體外試驗。雙鏈DNA被加熱到96℃,使得雙鏈分離成為兩條單鏈。但是在這個溫度下,DNA聚合酶被破壞,因此在每個循環(huán)的加熱步驟后必須補充新的聚合酶。穆利斯的原始PCR反應效率極低,需要大量時間和DNA聚合酶,并且在整個PCR反應中都需要人來照看。
后來,由嗜熱細菌水生棲熱菌(Thermus aquaticus)體內(nèi)產(chǎn)生的DNA聚合酶改善了這種低效的PCR反應。由于嗜熱細菌生活在溫度達到50至80 °C (122至176 °F)的間歇泉中,它的DNA聚合酶具有耐熱性。在用于PCR反應時,高溫并不能破壞這種DNA聚合酶,因此不需要不斷加入新的聚合酶,PCR反應由此變得簡單并且可以由機器操作。
最初的具有耐熱性的DNA聚合酶來自于水生棲熱菌(Thermus aquaticus),因此被稱為Taq。Taq酶被廣泛用于當前的PCR操作中。Taq酶的缺點是它缺少3'->5'校正外切酶活性,因此在復制DNA時有時會出錯,造成DNA序列突變(錯誤)。從古菌中獲得的Pwo酶及Pfu酶均有校正機制,能夠大大降低PCR反應中的突變。將Taq與Pfu結合使用可以保證真實準確得擴增DNA。
PCR用于擴增一小段已知的DNA片斷,可能是單個基因,或者僅僅是某個基因的一部分。與活體生物不同的是,PCR只能復制很短的DNA片斷,通常不超過10kbp。DNA是雙鏈分子,因此用互補DNA雙鏈的構造單位(核苷酸)來度量其大小,單位為堿基對(base pair, bp)。某些特定的方法可以擴增40kbp左右的片斷,但是這種大小與真核細胞的染色體DNA相比仍然是很少的。例如,人的體細胞DNA含有大約30億個堿基對。 目前應用的PCR反應需要幾個基本組成:
DNA模板(template),含有需要擴增的DNA片斷。
2個引物(primer),決定了需要擴增的起始和終止位置。(見下面引物一節(jié))
DNA聚合酶(polymerase),復制需要擴增的區(qū)域。
脫氧單核苷酸(dNTP),用于構造新的互補鏈。
緩沖體系,提供適合聚合酶行使功能的化學環(huán)境。
PCR反應在熱循環(huán)設備中進行。PCR儀可以將反應管加熱或冷卻到每步反應所需的精確的溫度。為防止反應體系中液體產(chǎn)生蒸氣,通常在反應管上加蓋加熱的蓋子(比加熱板溫度來的高),或者在反應體系表面加入一層石蠟油。
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