1、常用玻璃儀器的準(zhǔn)備 制備培養(yǎng)基所用的吸管、錐形瓶、毛細(xì)吸管、平皿等玻璃儀器用前要用肥皂水洗刷后用清水沖洗干凈,晾干后備用.(1)平皿用紙或布包好,或裝在金屬盒內(nèi),于121℃高壓蒸汽菌3min后烘干,備用.(2)試管管口用棉花塞或硅氟塑料試管塞塞好,再用布或報(bào)紙包扎好,121℃高壓蒸汽滅菌20℃后烘干,備用.(3)吸管及滴管先用少許棉花塞于吸口端(防止污染物吸出,或橡皮帽內(nèi)的氣體污染),然后用紙包后或裝入金屬吸管筒內(nèi),于121℃高壓蒸汽滅菌20min后烘干,備用.其他玻璃器皿均應(yīng)按上法處理,也應(yīng)裝金屬筒內(nèi)160℃干熱滅菌2h后,備用.2、培養(yǎng)基的制備及儲(chǔ)存 (1)溶化:一般應(yīng)放在玻璃器皿或搪瓷齊內(nèi).加入蒸餾水,隔水加熱以促其溶解,加熱時(shí)應(yīng)經(jīng)常攪拌,防止焦結(jié),待其溶解后補(bǔ)足水分.在使用干燥培養(yǎng)基時(shí),先將蒸餾水按定量加入容器中,然后稱取一定量培養(yǎng)基干粉放入水中,靜置10—15min,攪拌,振蕩,或延長(zhǎng)時(shí)間以促進(jìn)溶解,一般不要熱,必要時(shí)加熱,但時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),溫度不宜過(guò)高,避免某些營(yíng)養(yǎng)成分被破壞.(2)校正酸堿度(調(diào)節(jié)pH):培養(yǎng)基必須有適當(dāng)?shù)膒H.因此測(cè)定pH是培養(yǎng)基配制過(guò)程中的重要步驟之一,測(cè)定pH的標(biāo)準(zhǔn)溫度為25士2℃.調(diào)節(jié)pH可用無(wú)菌的1mol/l氫氧化鈉溶液或10%碳酸鈉溶液、1mol/l鹽酸溶液.當(dāng)調(diào)節(jié)緩沖液的pH時(shí),宜用6mol/l磷酸或10mol/l氫氧化鉀溶液.滅菌后的pH會(huì)比滅菌前的pH升高或降低,一般高壓滅菌前培養(yǎng)基的pH會(huì)比最終pH調(diào)高0.2左右,滅菌后基本合適.因此對(duì)培養(yǎng)基、緩沖液、試劑在滅菌前后的pH均進(jìn)行測(cè)定,并記下每次pH的測(cè)定結(jié)果,有助于積累數(shù)據(jù)考察每種培養(yǎng)基、緩沖液、試劑對(duì)滅菌程序的耐受性,從而指導(dǎo)滅菌前pH的調(diào)節(jié).干燥培養(yǎng)基一般已校正過(guò)pH,用時(shí)也必須再驗(yàn)證.測(cè)定時(shí),一般用指示劑滴入培養(yǎng)基觀察其顏色的變化,或用pH計(jì)校正,如與所需pH不符,可用以上的酸或堿液加以校正.調(diào)整pH后要加熱過(guò)濾,使培養(yǎng)基澄清.(3)培養(yǎng)基的分裝:大批量配制時(shí)使用的自動(dòng)分配器須經(jīng)校準(zhǔn)和確認(rèn).每次使用前后,均要對(duì)分配器的管道系統(tǒng)進(jìn)行沖洗,在分裝無(wú)菌培養(yǎng)基前,則要采用無(wú)菌硅膠管.固體培養(yǎng)基一般分裝在250ml、500ml錐形瓶中,高壓滅菌后根據(jù)需要分裝平皿或試管.平皿:傾注平皿,應(yīng)在無(wú)菌室中放置3—4h,如用塑料平皿須在35℃培養(yǎng)箱 中倒置30—60min.讓水蒸汽自然蒸發(fā).斜面:制備低層斜面分裝于試管,約占容積1/5,滅菌后趁熱斜放在細(xì)玻璃棒和木桿上,使成斜度,分裝使注意管口和瓶塞上勿沾有培養(yǎng)基,如沾有培養(yǎng)基應(yīng)用布抹去,以避免污染.高層斜面:制備高層斜面分裝于試管,約占試管容積的1/3,滅菌后趁熱放置成高層短斜面,待其凝固后應(yīng)用.分裝好的培養(yǎng)基或緩沖液等及時(shí)密封后必須在配制當(dāng)天(2h內(nèi)最佳)進(jìn)行滅菌處理.液體、半固體培養(yǎng)基一般在高壓滅前分裝,約裝試管容積的1/3,在滅菌后還要加其他成分的液體、半固體培養(yǎng)基,滅菌后再分裝于滅菌試管或錐形瓶中.培養(yǎng)基的滅菌:培養(yǎng)基的滅菌多采用高壓蒸汽滅菌,各種培養(yǎng)基的滅菌時(shí)間和壓力,按其成分不同而定.普通培養(yǎng)基采用121℃、103.42kPa滅菌15min,但容器和裝量較大時(shí),應(yīng)延長(zhǎng)至20min.含糖培養(yǎng)基115℃、68.85kPa滅菌30min.含糖、血清、雞蛋等培養(yǎng)基可用流動(dòng)蒸汽及血清凝固器80—100℃、30min,連續(xù)3d,間歇滅菌.血清或組織液,采用低熱56—58水浴1h,連續(xù)5—6d滅菌,一些遇高溫即被破壞的物質(zhì)如尿素、腹水等,可用細(xì)菌過(guò)濾器,過(guò)濾除菌.高壓滅菌應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)程執(zhí)行,必須逐漸加熱,徹底排除滅菌器內(nèi)的空氣,再逐漸升壓保持預(yù)定的壓力和時(shí)間,達(dá)到全部殺滅微生物.以上的滅菌時(shí)間和溫度要經(jīng)過(guò)驗(yàn)證確認(rèn),如不同類型培養(yǎng)基混合一起滅菌時(shí)宜采用115℃、68.85kPa滅菌30min為好.。
滅菌培養(yǎng)基配制過(guò)程中,所用的玻璃器皿要洗滌干凈,不能帶 有雜質(zhì)。
可先用清水沖洗,再浸人洗衣粉液中浸泡,用刷子內(nèi) 外刷洗,沖凈,再用蒸餾水沖洗1 ~2次,放人150°C的烘箱 中,干熱滅菌1小時(shí)后備用。吸管、量筒等難以洗滌的要先放 人洗液中浸泡2小時(shí),再用清水沖洗。
培養(yǎng)基的消毒、滅菌,一般采用高壓蒸氣鍋蒸10 ~20分 鐘。在培養(yǎng)基消毒、滅菌時(shí),可把接種植物材料用的蒸餾水盛 入三角瓶中,用棉塞塞緊,牛皮紙包裹瓶口,再用橡皮筋捆扎。
將懾子、剪刀、刀子等用具用布?jí)|包裹或放人鋁制飯盒中,與 培養(yǎng)基一起放人高壓鍋中消毒。培養(yǎng)基消毒后取出放人搪瓷 盤(pán)中,將盤(pán)子放入平坦的桌面上,讓培養(yǎng)基冷卻、凝固。
培養(yǎng)基的滅菌方法1、高壓蒸汽滅菌:高壓蒸汽滅菌適合于耐高溫培養(yǎng)基、接種器械和蒸餾水的滅菌。
培養(yǎng)基在愛(ài)制備過(guò)程中混入各種雜菌,分裝后應(yīng)立即滅菌,至少應(yīng)在24h內(nèi)完成滅菌工作。滅菌時(shí)一般是在0。
105MPa壓力下,溫度121℃時(shí),滅菌15~30min即可。 消毒時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),也不能超過(guò)規(guī)定的壓力范圍,否則有機(jī)物質(zhì)特別是維生素類物質(zhì)就會(huì)在高溫下分解,失去營(yíng)養(yǎng)作用,也會(huì)使培養(yǎng)基變質(zhì)、變色,甚至難以凝固。
將蒸餾水或自來(lái)水裝在三角瓶中,裝水量一般不超過(guò)瓶的2/3,用牛皮紙或硫酸紙包扎封口,然后放入高壓鍋中滅菌后即為無(wú)菌水。 滅菌后的培養(yǎng)基可放到培養(yǎng)室中預(yù)培養(yǎng)3d,若無(wú)污染現(xiàn)象,則證明滅菌是徹底的,可以使用。
暫時(shí)不用的培養(yǎng)基最好置于10℃下保存。含IAA或GA3的培養(yǎng)基應(yīng)在1周內(nèi)用完,其他培養(yǎng)基最多也不要超過(guò)1個(gè)月。
2、過(guò)濾滅菌:一些植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑及有機(jī)物,如IAA、GA3、ZT、CM等,遇熱容易分解,不能與培養(yǎng)基一起進(jìn)行高溫滅菌,而要使用細(xì)菌過(guò)濾器濾去其中的雜菌。 細(xì)菌過(guò)濾器與濾膜(孔徑0。
45微米)使用之前要先進(jìn)行高壓滅菌。過(guò)濾后的溶液要立即加入培養(yǎng)基中,若為液體培養(yǎng)基,可在培養(yǎng)基冷卻至30℃時(shí)加入;若為固體培養(yǎng)基,必須在培養(yǎng)基凝固之前(50-60℃)加入,振蕩使溶液與其他成分混合均勻。
原理 培養(yǎng)基是供微生物生長(zhǎng)、繁殖、代謝的混合養(yǎng)料。
由于微生物具有不同的營(yíng)養(yǎng)類型,對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的要求也各不相同,加之實(shí)驗(yàn)和研究的目的不同,所以培養(yǎng)基的種類很多,使用的原料也各有差異,但從營(yíng)養(yǎng)角度分析,培養(yǎng)基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)素以及水分等。另外,培養(yǎng)基還應(yīng)具有適宜的pH值、一定的緩沖能力、一定的氧化還原電位及合適的滲透壓。
瓊脂是從石花菜等海藻中提取的膠體物質(zhì),是應(yīng)用最廣的凝固劑。加瓊脂制成的培養(yǎng)基在98~100℃下融化,于45℃以下凝固。
但多次反復(fù)融化,其凝固性降低。任何一種培養(yǎng)基一經(jīng)制成就應(yīng)及時(shí)徹底滅菌,以備純培養(yǎng)用。
一般培養(yǎng)基的滅菌采用高壓蒸汽滅菌。3材料3.1器皿及材料 天平、稱量紙、牛角匙、精密pH試紙、量筒、刻度搪瓷杯、試管、三角瓶、漏斗、分裝架、移液管及移液管筒、培養(yǎng)皿及培養(yǎng)皿盒、玻璃棒、燒杯、試管架、鐵絲筐、剪刀、酒精燈、棉花、線繩、牛皮紙或報(bào)紙、紗布、乳膠管、電爐、滅菌鍋、干燥箱。
3.2藥品試劑 蛋白胨、牛肉膏、NaCl、K2HPO4、瓊脂、NaNO3、KCl、MgSO4、FeSO4、蔗糖、麥芽糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、乳糖、土豆汁、豆芽計(jì)、磷酸銨、5%NaOH溶液、5%HCl溶液。4流程 稱藥品→溶解→調(diào)pH值→融化瓊脂→過(guò)濾分裝→包扎標(biāo)記→滅菌→擺斜面或倒平板。
5步驟5.1培養(yǎng)基的制備5.1.1稱量藥品 根據(jù)培養(yǎng)基配方依次準(zhǔn)確稱取各種藥品,放入適當(dāng)大小的燒杯中,瓊脂不要加入。蛋白胨極易吸潮,故稱量時(shí)要迅速。
5.1.2溶解 用量筒取一定量(約占總量的1/2)蒸餾水倒入燒杯中,在放有石棉網(wǎng)的電爐上小火加熱,并用玻棒攪拌,以防液體溢出。待各種藥品完全溶解后,停止加熱,補(bǔ)足水分。
如果配方中有淀粉,則先將淀粉用少量冷水調(diào)成糊狀,并在火上加熱攪拌,然后加足水分及其它原料,待完全溶化后,補(bǔ)足水分。5.1.3調(diào)節(jié)pH 根據(jù)培養(yǎng)基對(duì)pH的要求,用5%NaOH或5%HC1溶液調(diào)至所需pH。
測(cè)定pH可用pH試紙或酸度計(jì)等。5.1.4溶化瓊脂 固體或半固體培養(yǎng)基須加入一定量瓊脂。
瓊脂加入后,置電爐上一面攪拌一面加熱,直至瓊脂完全融化后才能停止攪拌,并補(bǔ)足水分(水需預(yù)熱)。注意控制火力不要使培養(yǎng)基溢出或燒焦。
5.1.5過(guò)濾分裝 先將過(guò)濾裝置安裝好(圖3-1)。如果是液體培養(yǎng)基,玻璃漏斗中放一層濾紙,如果是固體或半固體培養(yǎng)基,則需在漏斗中放多層紗布,或兩層紗布夾一層薄薄的脫脂棉趁熱進(jìn)行過(guò)濾。
過(guò)濾后立即進(jìn)行分裝。分裝時(shí)注意不要使培養(yǎng)基沾染在管口或瓶口,以免浸濕棉塞, 引起污染。
液體分裝高度以試管高度的1/4左右為宜。固體分裝裝量為管高的1/5,半固體分裝試管一般以試管高度的1/3為宜;分裝三角瓶,其裝量以不超過(guò)三角瓶容積的一半為宜。
5.1.6包扎標(biāo)記 培養(yǎng)基分裝后加好棉塞或試管帽,再包上一層防潮紙,用棉繩系好。在包裝紙上標(biāo)明培養(yǎng)基名稱,制備組別和姓名、日期等。
5.1.7滅菌 上述培養(yǎng)基應(yīng)按培養(yǎng)基配方中規(guī)定的條件及時(shí)進(jìn)行滅菌。普通培養(yǎng)基為121℃20min,以保證滅菌效果和不損傷培養(yǎng)基的有效成份。
培養(yǎng)基經(jīng)滅菌后,如需要作斜面固體培養(yǎng)基,則滅菌后立即擺放成斜面(圖3-2),斜面長(zhǎng)度一般以不超過(guò)試管長(zhǎng)度的1/2為宜;半固體培養(yǎng)基滅菌后,垂直冷凝成半固體深層瓊脂。5.1.8倒平板 將需倒平板的培養(yǎng)基,于水浴鍋中冷卻到45~50℃,立刻倒平板。
5.2滅菌方法 滅菌是指殺死或消滅一定環(huán)境中的所有微生物,滅菌的方法分物理和化學(xué)滅菌法兩大類。本實(shí)驗(yàn)主要介紹物理方法的一種,即加熱滅菌。
加熱滅菌包括濕熱和干熱滅菌兩種。通過(guò)加熱使菌體內(nèi)蛋白質(zhì)凝固變性,從而達(dá)到殺菌目的。
蛋白質(zhì)的凝固變性與其自身含水量有關(guān),含水量越高,其凝固所需要的溫度越低。在同一溫度下,濕熱的殺菌效力比干熱大,因?yàn)樵跐駸崆闆r下,菌體吸收水分,使蛋白質(zhì)易于凝固;同時(shí)濕熱的穿透力強(qiáng),可增加滅菌效力。
5.2.1.高壓蒸汽滅菌法 高壓蒸汽滅菌用途廣,效率高,是微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中最常用的滅菌方法。這種滅菌方法是基于水的沸點(diǎn)隨著蒸汽壓力的升高而升高的原理設(shè)計(jì)的。
當(dāng)蒸汽壓力達(dá)到1.05kg/cm2時(shí),水蒸氣的溫度升高到121℃,經(jīng)15~30min,可全部殺死鍋內(nèi)物品上的各種微生物和它們的孢子或芽孢。一般培養(yǎng)基、玻璃器皿以及傳染性標(biāo)本和工作服等都可應(yīng)用此法滅菌(圖3-4)。
5.2.1.1操作方法和注意事項(xiàng)如下 加水 打開(kāi)滅菌鍋蓋,向鍋內(nèi)加水到水位線。立式消毒鍋?zhàn)詈糜靡阎箝_(kāi)過(guò)的水,以便減少水垢在鍋內(nèi)的積存。
注意水要加夠,防止滅菌過(guò)程中干鍋。裝料、加蓋 滅菌材料放好后,關(guān)閉滅菌器蓋,采用對(duì)角式均勻擰緊鍋蓋上的螺旋,使蒸汽鍋密閉,勿使漏氣。
排氣 打開(kāi)排氣口(也叫放氣閥)。用電爐加熱,待水煮沸后,水蒸氣和空氣一起從排氣孔排出,當(dāng)有大量蒸汽排出時(shí),維持5min,使鍋內(nèi)冷空氣完全排凈。
升壓、保壓和降壓 當(dāng)鍋內(nèi)冷空氣排凈時(shí),即可關(guān)閉排氣閥,壓力開(kāi)始上升。當(dāng)壓力上升至所需壓力時(shí),控制電壓以維持恒溫,并開(kāi)始計(jì)算滅菌時(shí)間,待時(shí)間達(dá)到要求(一般培養(yǎng)基和器皿滅菌控制在121℃,20min)后,停止加熱,待壓力降至接近“0”時(shí),打開(kāi)放氣。
1、常用玻璃儀器的準(zhǔn)備 制備培養(yǎng)基所用的吸管、錐形瓶、毛細(xì)吸管、平皿等玻璃儀器用前要用肥皂水洗刷后用清水沖洗干凈,晾干后備用.(1)平皿用紙或布包好,或裝在金屬盒內(nèi),于121℃高壓蒸汽菌3min后烘干,備用.(2)試管管口用棉花塞或硅氟塑料試管塞塞好,再用布或報(bào)紙包扎好,121℃高壓蒸汽滅菌20℃后烘干,備用.(3)吸管及滴管先用少許棉花塞于吸口端(防止污染物吸出,或橡皮帽內(nèi)的氣體污染),然后用紙包后或裝入金屬吸管筒內(nèi),于121℃高壓蒸汽滅菌20min后烘干,備用.其他玻璃器皿均應(yīng)按上法處理,也應(yīng)裝金屬筒內(nèi)160℃干熱滅菌2h后,備用.2、培養(yǎng)基的制備及儲(chǔ)存 (1)溶化:一般應(yīng)放在玻璃器皿或搪瓷齊內(nèi).加入蒸餾水,隔水加熱以促其溶解,加熱時(shí)應(yīng)經(jīng)常攪拌,防止焦結(jié),待其溶解后補(bǔ)足水分.在使用干燥培養(yǎng)基時(shí),先將蒸餾水按定量加入容器中,然后稱取一定量培養(yǎng)基干粉放入水中,靜置10—15min,攪拌,振蕩,或延長(zhǎng)時(shí)間以促進(jìn)溶解,一般不要熱,必要時(shí)加熱,但時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),溫度不宜過(guò)高,避免某些營(yíng)養(yǎng)成分被破壞.(2)校正酸堿度(調(diào)節(jié)pH):培養(yǎng)基必須有適當(dāng)?shù)膒H.因此測(cè)定pH是培養(yǎng)基配制過(guò)程中的重要步驟之一,測(cè)定pH的標(biāo)準(zhǔn)溫度為25士2℃.調(diào)節(jié)pH可用無(wú)菌的1mol/l氫氧化鈉溶液或10%碳酸鈉溶液、1mol/l鹽酸溶液.當(dāng)調(diào)節(jié)緩沖液的pH時(shí),宜用6mol/l磷酸或10mol/l氫氧化鉀溶液.滅菌后的pH會(huì)比滅菌前的pH升高或降低,一般高壓滅菌前培養(yǎng)基的pH會(huì)比最終pH調(diào)高0.2左右,滅菌后基本合適.因此對(duì)培養(yǎng)基、緩沖液、試劑在滅菌前后的pH均進(jìn)行測(cè)定,并記下每次pH的測(cè)定結(jié)果,有助于積累數(shù)據(jù)考察每種培養(yǎng)基、緩沖液、試劑對(duì)滅菌程序的耐受性,從而指導(dǎo)滅菌前pH的調(diào)節(jié).干燥培養(yǎng)基一般已校正過(guò)pH,用時(shí)也必須再驗(yàn)證.測(cè)定時(shí),一般用指示劑滴入培養(yǎng)基觀察其顏色的變化,或用pH計(jì)校正,如與所需pH不符,可用以上的酸或堿液加以校正.調(diào)整pH后要加熱過(guò)濾,使培養(yǎng)基澄清.(3)培養(yǎng)基的分裝:大批量配制時(shí)使用的自動(dòng)分配器須經(jīng)校準(zhǔn)和確認(rèn).每次使用前后,均要對(duì)分配器的管道系統(tǒng)進(jìn)行沖洗,在分裝無(wú)菌培養(yǎng)基前,則要采用無(wú)菌硅膠管.固體培養(yǎng)基一般分裝在250ml、500ml錐形瓶中,高壓滅菌后根據(jù)需要分裝平皿或試管.平皿:傾注平皿,應(yīng)在無(wú)菌室中放置3—4h,如用塑料平皿須在35℃培養(yǎng)箱 中倒置30—60min.讓水蒸汽自然蒸發(fā).斜面:制備低層斜面分裝于試管,約占容積1/5,滅菌后趁熱斜放在細(xì)玻璃棒和木桿上,使成斜度,分裝使注意管口和瓶塞上勿沾有培養(yǎng)基,如沾有培養(yǎng)基應(yīng)用布抹去,以避免污染.高層斜面:制備高層斜面分裝于試管,約占試管容積的1/3,滅菌后趁熱放置成高層短斜面,待其凝固后應(yīng)用.分裝好的培養(yǎng)基或緩沖液等及時(shí)密封后必須在配制當(dāng)天(2h內(nèi)最佳)進(jìn)行滅菌處理.液體、半固體培養(yǎng)基一般在高壓滅前分裝,約裝試管容積的1/3,在滅菌后還要加其他成分的液體、半固體培養(yǎng)基,滅菌后再分裝于滅菌試管或錐形瓶中.培養(yǎng)基的滅菌:培養(yǎng)基的滅菌多采用高壓蒸汽滅菌,各種培養(yǎng)基的滅菌時(shí)間和壓力,按其成分不同而定.普通培養(yǎng)基采用121℃、103.42kPa滅菌15min,但容器和裝量較大時(shí),應(yīng)延長(zhǎng)至20min.含糖培養(yǎng)基115℃、68.85kPa滅菌30min.含糖、血清、雞蛋等培養(yǎng)基可用流動(dòng)蒸汽及血清凝固器80—100℃、30min,連續(xù)3d,間歇滅菌.血清或組織液,采用低熱56—58水浴1h,連續(xù)5—6d滅菌,一些遇高溫即被破壞的物質(zhì)如尿素、腹水等,可用細(xì)菌過(guò)濾器,過(guò)濾除菌.高壓滅菌應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)程執(zhí)行,必須逐漸加熱,徹底排除滅菌器內(nèi)的空氣,再逐漸升壓保持預(yù)定的壓力和時(shí)間,達(dá)到全部殺滅微生物.以上的滅菌時(shí)間和溫度要經(jīng)過(guò)驗(yàn)證確認(rèn),如不同類型培養(yǎng)基混合一起滅菌時(shí)宜采用115℃、68.85kPa滅菌30min為好.。
培養(yǎng)基的滅菌方法
1、高壓蒸汽滅菌:
高壓蒸汽滅菌適合于耐高溫培養(yǎng)基、接種器械和蒸餾水的滅菌。培養(yǎng)基在愛(ài)制備過(guò)程中混入各種雜菌,分裝后應(yīng)立即滅菌,至少應(yīng)在24h內(nèi)完成滅菌工作。滅菌時(shí)一般是在0.105MPa壓力下,溫度121℃時(shí),滅菌15~30min即可。消毒時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),也不能超過(guò)規(guī)定的壓力范圍,否則有機(jī)物質(zhì)特別是維生素類物質(zhì)就會(huì)在高溫下分解,失去營(yíng)養(yǎng)作用,也會(huì)使培養(yǎng)基變質(zhì)、變色,甚至難以凝固。將蒸餾水或自來(lái)水裝在三角瓶中,裝水量一般不超過(guò)瓶的2/3,用牛皮紙或硫酸紙包扎封口,然后放入高壓鍋中滅菌后即為無(wú)菌水。 滅菌后的培養(yǎng)基可放到培養(yǎng)室中預(yù)培養(yǎng)3d,若無(wú)污染現(xiàn)象,則證明滅菌是徹底的,可以使用。暫時(shí)不用的培養(yǎng)基最好置于10℃下保存。含IAA或GA3的培養(yǎng)基應(yīng)在1周內(nèi)用完,其他培養(yǎng)基最多也不要超過(guò)1個(gè)月。
2、過(guò)濾滅菌:
一些植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑及有機(jī)物,如IAA、GA3、ZT、CM等,遇熱容易分解,不能與培養(yǎng)基一起進(jìn)行高溫滅菌,而要使用細(xì)菌過(guò)濾器濾去其中的雜菌。細(xì)菌過(guò)濾器與濾膜(孔徑0.45微米)使用之前要先進(jìn)行高壓滅菌。過(guò)濾后的溶液要立即加入培養(yǎng)基中,若為液體培養(yǎng)基,可在培養(yǎng)基冷卻至30℃時(shí)加入;若為固體培養(yǎng)基,必須在培養(yǎng)基凝固之前(50-60℃)加入,振蕩使溶液與其他成分混合均勻。
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