植物細(xì)胞組織培養(yǎng)
一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?
植物細(xì)胞和組織培養(yǎng)的技術(shù)性強(qiáng),要求無(wú)菌操作,通過(guò)本實(shí)驗(yàn)可初步掌握常規(guī)的組織培養(yǎng)技術(shù),加深對(duì)無(wú)菌操作的了解。
二.實(shí)驗(yàn)原理
植物的全能性:植物體的任何一個(gè)細(xì)胞都具有生長(zhǎng)分化成為一個(gè)完整植株的能力,稱為植物的全能性。
植物組織培養(yǎng)就是利用植物的全能性進(jìn)行離體無(wú)菌植物培養(yǎng)的一門技術(shù)。植物組織培養(yǎng)按其原始意義,就是指愈傷組織培養(yǎng)。但發(fā)展至今,其范圍日益擴(kuò)大,已包括植物和它的離體器官、組織、細(xì)胞和原生質(zhì)體的離體無(wú)菌培養(yǎng)。因此,擁有幾種不同水平的培養(yǎng)技術(shù),即整體的、器官的、組織的、細(xì)胞的和原生質(zhì)的培養(yǎng)技術(shù)。它們的涵義是:
1.植株培養(yǎng)。指以具備完整植株形態(tài)的材料(如幼苗和較大的植株)外植體的無(wú)菌培養(yǎng)。
2. 胚胎培養(yǎng)。指以從胚珠中分離出來(lái)的成熟或未成熟胚為外植體的離體無(wú)菌培養(yǎng)。
3. 器官培養(yǎng)。指以植物的根,莖,葉,花,果等器官為外植體的離體無(wú)菌培養(yǎng),如根的根尖和切段,莖的莖尖,莖節(jié)和切段,葉的葉原基,葉片,葉柄,葉鞘和子葉,花器的花瓣,雄蕊(花藥,花絲),胚珠,子房,果實(shí)等的離體無(wú)菌培養(yǎng)。
4. 組織培養(yǎng)。指以分離出植物各部位的組織(如分生組織,形成層,木質(zhì)部,韌皮部,表皮,皮層,胚乳組織,薄壁組織,髓部等),或已誘導(dǎo)的愈傷組織為外植體的離體無(wú)菌培養(yǎng)。這是狹義的組織培養(yǎng)。
5. 細(xì)胞培養(yǎng)。指以單個(gè)的游離細(xì)胞(如用果酸酶從組織中分離的體細(xì)胞,或花粉細(xì)胞,卵細(xì)胞)為接種體的離體無(wú)菌培養(yǎng)。
6. 原生質(zhì)體培養(yǎng)。指以除去細(xì)胞壁的原生質(zhì)體為外植體的離體無(wú)菌培養(yǎng)。
本實(shí)驗(yàn)選擇煙草和豌豆為材料,煙草(Nicotiana)屬茄科植物,是重要的工業(yè)原料,也是植物組織培養(yǎng)的四大典型實(shí)驗(yàn)植物(煙草、矮牽牛、胡蘿卜、蕓苔)中重要的一種,它的研究的最為廣泛,也始終領(lǐng)先于其他的植物材料,目前,66個(gè)煙草品種中,再生成植株的有16個(gè)種,通過(guò)花藥培養(yǎng)再生成花粉植株的有12個(gè)種,通過(guò)原生質(zhì)體培養(yǎng)再生成植株的有20個(gè)種,通過(guò)煙草的種內(nèi)和種間原生質(zhì)體融合再生成雜種的植物分別為3個(gè)和12個(gè)種。豌豆(Pisum sativum)屬豆科植物,是糧食、飼料和重要的蔬菜作物,也是遺傳學(xué)家和植物生理學(xué)家感興趣和樂(lè)于采用的實(shí)驗(yàn)植物,豌豆的根、莖、子葉、下胚軸、上胚軸、花芽等外植體,皆可形成愈傷組織,其中莖尖、幼胚、幼葉等器官可成功的再生成植株。莖尖培養(yǎng)可包括小至十幾微米的莖尖分生組織(生長(zhǎng)點(diǎn))和大至幾十毫米的莖尖或更大的芽培養(yǎng)。在實(shí)踐應(yīng)用上,常采用生長(zhǎng)點(diǎn)的培養(yǎng)使患病植物去病毒,以達(dá)到挽救優(yōu)良品種,提高產(chǎn)量和質(zhì)量之目的。
三.實(shí)驗(yàn)材料
儀器設(shè)備
1.酒精燈、100ml三角燒瓶,9厘米培養(yǎng)皿植物組織培養(yǎng)的過(guò)程;
2.鑷子、剪刀、解剖針;
3.雙筒解剖顯微鏡;
4.光照培養(yǎng)箱或溫室;
材料和試劑
1.材料 煙草無(wú)菌苗、豌豆幼苗。
2.試劑
(1)MS培養(yǎng)基,植物激素:NAA、6-BA等;
(2)飽和漂白粉液(次氯酸鈉);
(3)70%酒精、100%酒精、酒精棉球;
(4)無(wú)菌水
四.實(shí)驗(yàn)步驟
1.煙草無(wú)菌苗的快速切繁—繼代培養(yǎng):(要求完全無(wú)菌操作)
每組一瓶煙草無(wú)菌苗,請(qǐng)細(xì)心操作,以免污染。
(1) 在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,點(diǎn)著酒精燈,將雙手用酒精棉球擦拭消毒,打開(kāi)生長(zhǎng)好無(wú)菌煙草苗的三角瓶,三角瓶的瓶口使用前后需在酒精燈外焰上燒過(guò)滅菌。
(2) 用滅菌的鑷子輕輕捏出1株幼苗,用滅菌的剪刀將無(wú)菌苗剪成0.5-1厘米的小段,要求每段至少包含一個(gè)生長(zhǎng)點(diǎn),直接剪入盛有MS培養(yǎng)基的三角瓶中,每一個(gè)切段必須直接接觸培養(yǎng)基,三角瓶口重新燒過(guò)滅菌,并重新封好口。
(3) 在光照培養(yǎng)箱中15~25℃,16小時(shí)光照條件下培養(yǎng)4周,可長(zhǎng)成完整植株,能用于田間移栽。
2.豌豆苗的莖尖培養(yǎng)
⑴ 取發(fā)芽6天的豌豆幼苗10株,簡(jiǎn)取1厘米左右的莖尖,浸入70%的酒精中1分鐘,再浸入飽和次氯酸鈉溶液中消毒15分鐘,(此步以后要求無(wú)菌)用無(wú)菌水中沖洗5次,在滅菌的濾紙上吸干水分,放入滅菌的培養(yǎng)皿中。
⑵ 在雙目解剖鏡下,用滅菌的解剖針剝?nèi)ビ兹~露出生長(zhǎng)錐,用滅菌的解剖針挑取帶著兩至三個(gè)葉原基的生長(zhǎng)錐。
⑶ 將挑好的莖尖移到MS+10.7μmol/L萘乙酸(NAA)+4.4μmol/L 6-芐基腺嘌呤(6-BA)的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)愈傷組織形成,用封口膜將培養(yǎng)皿封好。
[4]在恒溫培養(yǎng)箱中,26℃下,培養(yǎng)六周,形成愈傷組織,經(jīng)繼代后,可用于生根培養(yǎng)。
聲明:本網(wǎng)站尊重并保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán),根據(jù)《信息網(wǎng)絡(luò)傳播權(quán)保護(hù)條例》,如果我們轉(zhuǎn)載的作品侵犯了您的權(quán)利,請(qǐng)?jiān)谝粋€(gè)月內(nèi)通知我們,我們會(huì)及時(shí)刪除。
蜀ICP備2020033479號(hào)-4 Copyright ? 2016 學(xué)習(xí)鳥(niǎo). 頁(yè)面生成時(shí)間:4.256秒