2.6一二氯酚靛酚滴定法測(cè)定還原型抗壞血酸是多年采用的經(jīng)典方法。該法簡(jiǎn)便易行、快速,目前仍被廣泛運(yùn)用。但此方法尚存著一定均缺點(diǎn),突出的一點(diǎn)是滴定終點(diǎn)難以確定。利用2.6一二氯酚靛酚滴定含有抗壞血酸的酸性物質(zhì)溶液而當(dāng)抗壞血酸尚未被全部被氧化時(shí),滴下的2.6一二氮酚靛酚立即被還原成無(wú)色。而溶液中的坑壞血酸一旦被氧化,則滴入的2.6一二氮酚靛酚則立即使溶液呈現(xiàn)紅色。所以,當(dāng)溶液從無(wú)色轉(zhuǎn)變成微紅色時(shí),即表示溶液中的抗壞血酸剛剛
被全部氧化,此時(shí)為滴定終點(diǎn)。此種方法對(duì)于無(wú)色或淡黃色、綠色樣品液的滴定終點(diǎn)易確定,而對(duì)于山植、大棗、草葺、酸棗等紫色、粉紅或褐色等色澤的朵蔬樣品液的滴定終點(diǎn)就難以觀察確定。為此,往往經(jīng)稀釋,添加活性炭、白陶土來(lái)進(jìn)行脫色處理,添加維生素C的方法來(lái)解決。既使如此,仍難得到滿意的結(jié)果,測(cè)定數(shù)據(jù)也很難準(zhǔn)確。為克服以上缺點(diǎn),近年來(lái)經(jīng)反復(fù)多次的實(shí)驗(yàn)研究,采用2.6一二氯酚靛酚反滴定法測(cè)果蔬中還原抗壞血酸,終于摸索出比較合理的實(shí)
驗(yàn)條件,收到了比較滿意的效果。
維生素A為用1g含270萬(wàn)單位以上的維生素A醋酸酯結(jié)晶加精致植物油制成的油溶液。維生素A膠丸為取維生素A,加精煉食用植物油(在0℃左右脫去固體脂肪)溶解并調(diào)整濃度后制成。2005版《中國(guó)藥典》二部附錄(VII J)收載了其含量測(cè)定方法。
文獻(xiàn)報(bào)道的方法:
馬莉等用RP-HPLC法測(cè)定維生素A的含量。儀器:島津LC-10AT。色譜柱:Huupersil ODS(150mm*4.6mm);流動(dòng)相為96%甲醇;流速:1.0ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng):325nm;柱溫:25℃。
黃雙路等用鹽酸溶解維生素A 膠丸的膠殼后,以環(huán)己烷萃取內(nèi)容物,采用紫外分光光度法測(cè)定含量,最大吸收峰波長(zhǎng)在326~329nm之間。
李枝端等用三點(diǎn)校正法測(cè)定維生素A的含量。維生素A醋酸酯測(cè)定波長(zhǎng):λ1=316nm,λ2=328nm,λ3=340nm;維生素A醇測(cè)定波長(zhǎng):λ1=310nm,λ2=325nm,λ3=334nm。
維生素C不同的測(cè)定方法 目前研究維生素C測(cè)定方法的報(bào)道較多,有關(guān)維生素C的測(cè)定方法如熒光法、2,6-二氯靛酚滴定法、2,4-二硝基苯肼法、光度分析法、化學(xué)發(fā)光法、電化學(xué)分析法及色譜法等,各種方法對(duì)實(shí)際樣品的測(cè)定均有滿意的效果. 為了解國(guó)內(nèi)VC含量測(cè)定方法及其應(yīng)用方面的現(xiàn)狀及發(fā)展態(tài)勢(shì).方法以"維生素C或抗壞血酸和測(cè)定"為檢索詞對(duì)1994~2002年中國(guó)期刊網(wǎng)全文數(shù)據(jù)庫(kù)(CNKI)中的理工A、B和醫(yī)藥衛(wèi)生專輯進(jìn)行篇名檢索,對(duì)所得有關(guān)維生素C含量測(cè)定的文獻(xiàn)數(shù)據(jù)分別以年代、作者區(qū)域、載刊等級(jí)、樣品類(lèi)型、測(cè)定方法等進(jìn)行計(jì)量分析.結(jié)果核心期刊載刊文獻(xiàn)占文獻(xiàn)總量的45.06%,其中光度法占65.69%,電化法占18.63%,色譜法占12.75%;復(fù)雜被測(cè)樣品文獻(xiàn)占文獻(xiàn)總量的45.06%,其中光度法占60.92%,色譜法占19.54%,電化法占10.34%.結(jié)論目前國(guó)內(nèi)維生素C含量測(cè)定仍以光度法為主流,但近年來(lái)色譜法,特別是HPLC法上升趨勢(shì)尤為明顯. 一.熒光法 1.原理 樣品中還原型抗壞血酸經(jīng)活性炭氧化成脫氫型抗壞血酸后,與鄰苯二胺(OPDA)反應(yīng)生成具有熒光的喹喔啉(quinoxaline),其熒光強(qiáng)度與脫氫抗壞血酸的濃度在一定條件下成正比,以此測(cè)定食物中抗壞血酸和脫氫抗壞血酸的總量。
脫氫抗壞血酸與硼酸可形成復(fù)合物而不與OPDA反應(yīng),以此排除樣品中熒光雜質(zhì)所產(chǎn)生的干擾。本方法的最小檢出限為0.022 g/ml。
2.適用范圍 本方法適用于蔬菜、水果及其制品中總抗壞血酸的測(cè)定 3. 注意事項(xiàng) 3.1 大多數(shù)植物組織內(nèi)含有一種能破壞抗壞血酸的氧化酶,因此,抗壞血酸的測(cè)定應(yīng)采用新鮮樣品并盡快用偏磷酸-醋酸提取液將樣品制成勻漿以保存維生C。 3.2 某些果膠含量高的樣品不易過(guò)濾,可采用抽濾的方法,也可先離心,再取上清液過(guò)濾。
3.3活性炭可將抗壞血酸氧化為脫氫抗壞血酸,但它也有吸附抗壞血酸的作用,故活性炭用量應(yīng)適當(dāng)與準(zhǔn)確,所以,應(yīng)用天平稱量。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明,用2g活性炭能使測(cè)定樣品中還原型抗壞血酸完全氧化為脫氫型,其吸附影響不明顯。
二、2,6-二氯靛酚滴定法(還原型VC) 1、原理: 還原型抗壞血酸還原染料2,6-二氯靛酚,該染料在酸性中呈紅色,被還原后紅色消失。還原型抗壞血酸還原2,6-二氯靛酚后,本身被氧化成脫氫抗壞血酸。
在沒(méi)有雜質(zhì)干擾時(shí),一定量的樣品提取液還原標(biāo)準(zhǔn)2,6-二氯靛酚的量與樣品中所含維生素C的量成正比。本法用于測(cè)定還原型抗壞血酸,總抗壞血酸的量常用2,4-二硝基苯肼法和熒光分光光度法測(cè)定。
2、注意事項(xiàng) ⑴ 所有試劑的配制最好都用重蒸餾水; ⑵ 滴定時(shí),可同時(shí)吸二個(gè)樣品。一個(gè)滴定,另一個(gè)作為觀察顏色變化的參考; ⑶ 樣品進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室后,應(yīng)浸泡在已知量的2%草酸液中,以防氧化,損失維生素C; ⑷ 貯存過(guò)久的罐頭食品,可能含有大量的低鐵離子(Fe2+),要用8%的醋酸代替2%草酸。
這時(shí)如用草酸,低鐵離子可以還原2,6-二氯靛酚,使測(cè)定數(shù)字增高,使用醋酸可以避免這種情況的發(fā)生; ⑸ 整個(gè)操作過(guò)程中要迅速,避免還原型抗壞血酸被氧化; ⑹ 在處理各種樣品時(shí),如遇有泡沫產(chǎn)生,可加入數(shù)滴辛醇消除; ⑺ 測(cè)定樣液時(shí),需做空白對(duì)照,樣液滴定體積扣除空白體積。 3優(yōu)點(diǎn):它具有簡(jiǎn)便、快速、比較準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn),適用于許多不同類(lèi)型樣品的分析。
缺點(diǎn)是不能直接測(cè)定樣品中的脫氫抗壞血酸及結(jié)合抗壞血酸的含量,易受其他還原物質(zhì)的干擾。如果樣品中含有色素類(lèi)物質(zhì),將給滴定終點(diǎn)的觀察造成困難。
在酸性環(huán)境中,抗壞血酸(還原型)能將染料2,6—DCIP還原成無(wú)色的還原型2,6—DCIP,而抗壞血酸則被氧化成脫氫抗壞血酸。氧化型2,6—DCIP在中性或堿性溶液中呈藍(lán)色,但在酸性溶液中則呈粉紅色。
因此,當(dāng)用2,6—DICP滴定含有抗壞血酸的酸性溶液時(shí),在抗壞血酸未被全部氧化前,滴下的2,6—DCIP 立即被還原成無(wú)色,一旦溶液中的抗壞血酸全部被氧化時(shí),則滴下微量過(guò)剩的2,6—DCIP 便立即使溶液顯示淡粉紅色或微紅色,此時(shí)即為滴定終點(diǎn),表示溶液中的抗壞血酸剛剛?cè)勘谎趸?。依?jù)滴定時(shí)2,6—DCIP 標(biāo)準(zhǔn)溶液的消耗量 (ml),可以計(jì)算出被測(cè)樣品中抗壞血酸的含量。
氧化型2,6—DCIP與還原型抗壞血酸常在稀草酸或偏磷酸溶液中進(jìn)行反應(yīng)。即先將樣品溶于一定濃度的酸性溶液中或經(jīng)抽提后,再用2,6—DCIP標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至終點(diǎn)。
食物和生物材料中常含有其他還原物質(zhì),其中有些還原物質(zhì)可使2,6—DCIP還原脫色。為了消除這些還原物質(zhì)對(duì)定量測(cè)定的干擾,可用抗壞血酸氧化酶處理,破壞樣品中還原型抗壞血酸后,再用2,6—DCIP 滴定樣品中其他還原物質(zhì)。
然后從滴定未經(jīng)酶處理樣品時(shí)2,6—DCIP標(biāo)準(zhǔn)溶液的總消耗量中,減去滴定非抗壞血酸還原物質(zhì)2,6—DCIP 標(biāo)準(zhǔn)溶液的消耗量,即為滴定抗壞血酸實(shí)際所消耗的2,6—DCIP標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積,由此可以計(jì)算出樣品中抗壞血酸的含量。另外,還可利用抗壞血酸和其他還原物質(zhì)與2,6—DCIP反應(yīng)速度的差別,并通過(guò)控制樣品溶液在pH1 — 3 范圍內(nèi),進(jìn)行快速滴定,可以消除或減少其他還原物質(zhì)的作用,一般在這樣的條件下,干擾物質(zhì)與2,6—DCIP的反應(yīng)是很慢的或受到抑制。
生物體液(如血液、尿等)中的。
取4g新鮮的土豆用刀切碎,再用研磨研磨成像土豆泥的樣子。
2
用5ml2%草酸加到研缽中進(jìn)行溶解,并用50ml容量瓶進(jìn)行定容。
3
定容后上下?lián)u晃,以使溶劑溶解充分,并用漏斗的濾紙析出純凈的濾液。
4
取析出的濾液進(jìn)行滴定,共取30ml。分三次,每次10ml。最后取平均值。滴定終點(diǎn)是出現(xiàn)粉紅并且15s內(nèi)不褪色即可。記錄下每次滴定所用的2,6-二氯酚靛酚溶液的體積。
5
實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,所滴定的溶液的顏色,為粉紅色。
END
2,6-二氯酚靛酚的標(biāo)定(測(cè)出公式中的K值)
分別取5ml標(biāo)準(zhǔn)的維生素 C(里加5ml1%的草酸),和5ml,1%的草酸進(jìn)行滴定。
用2,6-二氯酚靛酚進(jìn)行的標(biāo)定,兩瓶都進(jìn)行三次,最后取平均值。
END
注意事項(xiàng)
計(jì)算公式: 1.根據(jù)滴定前后的物質(zhì)的量(n)不變,可以得出CV=cv,化簡(jiǎn)可得到,1ml2,6-二氯酚靛酚的標(biāo)定所對(duì)應(yīng)的維生素的含量,這樣已知2,6-二氯酚靛酚的標(biāo)定,就知道維生素的的含量了,然后除以提取的樣品比,救治總樣品含多少了。
分步解釋:第一步,已測(cè)出樣品中含草酸的維生素和草酸得含量,是用2,6-二氯酚靛酚的標(biāo)定體積表示的,轉(zhuǎn)化成樣品的維生素C的含量。第二步,實(shí)驗(yàn)二已測(cè)出K值,(質(zhì)量乘體積的比是相等的,參看注意事項(xiàng)一說(shuō)的)。然后用其和總質(zhì)量乘體積的比,算出維生素C的含量,轉(zhuǎn)化為百分?jǐn)?shù)。
蔬菜中維生素C的測(cè)量
用品:試管、研缽、紗布、西紅柿、黃瓜、淀粉碘酒溶液、氫氧化鈉溶液。
原理:維生素C又叫抗壞血酸,它的第2、3碳位的烯醇結(jié)構(gòu)具有很強(qiáng)的還原性,能把碘原子還原成碘離子,使原來(lái)淀粉遇碘所顯示的藍(lán)色自行褪去。維生素C在受熱及堿性條件下,易分解破壞。
操作:
1.制備汁液:取新鮮西紅柿、黃瓜各100g,洗凈后在研缽中搗爛,用紗布包住擠出汁液待用。
2.取上述制出的汁液各1mL,分盛兩支試管中,各加6滴淀粉碘酒溶液,發(fā)現(xiàn)顏色變化是:西紅柿汁中藍(lán)色褪,黃瓜汁中還有較淺的藍(lán)色。
3.取由1制出的汁液各1mL,加熱至沸,并保持沸騰約15min,然后加入淀粉碘酒溶液各6滴,發(fā)現(xiàn)藍(lán)色基本保持不變。
4.取由1制出的汁液各1mL,各加氫氧化鈉溶液各6滴,振蕩均勻后,各加淀粉碘酒溶液各6滴,發(fā)現(xiàn)藍(lán)色基本保持不變。
結(jié)論:
1.蔬菜中維生素C的含量,是依據(jù)相同實(shí)驗(yàn)條件下藍(lán)色的褪色程度來(lái)確定,藍(lán)色深則含量低,藍(lán)色愈淺則含量愈高。
2.蔬菜燒煮時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng),也不能加堿,否則維生素C被破壞。
水果中維生素c含量的測(cè)定方法有三種,分別為原子吸收分光光度法、紫外可見(jiàn)分光光度法、高效液相色譜法。
1、原子吸收分光光度法
利用原子吸收分光光度法問(wèn)接測(cè)定維生素C的含量,是利用維生素C可以與一些金屬離子發(fā)生氧化還原反應(yīng),通過(guò)測(cè)定反應(yīng)掉的金屬離子的量,進(jìn)而間接計(jì)算出維生素c的含量。
2、紫外-可見(jiàn)分光光度法
利用紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定維生素C的含量是基于維生素c在紫外光區(qū)有特征吸收,但是因?yàn)榫S生素C結(jié)構(gòu)中具有不飽和鍵,具有還原性,不易穩(wěn)定存在,直接測(cè)定誤差較大。所以在利用紫外分光光度法測(cè)定時(shí),維生素標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測(cè)樣的配制條件非常重要。
3、高效液相色譜法
高效液相色譜法是以液體為流動(dòng)相,采用高壓輸液系統(tǒng),將維生素C的溶劑裝有固定相的色譜柱,在柱內(nèi)各成分被分離后,進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè),從而測(cè)量出維生素c的含量。
擴(kuò)展資料
維生素c含量的測(cè)定方法對(duì)比:
由于維生素C自身的不穩(wěn)定,導(dǎo)致了很多方法測(cè)定結(jié)果誤差較大,所以對(duì)維生素C穩(wěn)定存在條件的探索非常重要。高效液相色譜法因?yàn)闇y(cè)定較準(zhǔn)確、靈敏度高、選擇性好,有較好的發(fā)展前景,是目前發(fā)展較快的一種方法。
參考資料來(lái)源:百度百科-維生素c
百度百科-高效液相色譜
百度百科-原子吸收分光光度法
百度百科-紫外-可見(jiàn)分光光度法
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