分選抗體的方法(抗體的制備方法)

1.抗體的制備方法有哪些

直接法 1.檢查抗原法 這是最早的方法，用已知特異性抗體與熒光素結(jié)合，制成熒光特異性抗體，直接與細胞或組織中相應抗原結(jié)合，在熒光顯微鏡下即可見抗原存在部位呈現(xiàn)特異性熒光。

此法很特異和簡便，但一種熒光抗體只能檢查一種抗原，敏感性較差。 2.檢查抗體法 將抗原標記上熒光素，即為熒光抗原，用此熒光抗原與細胞或組織內(nèi)相應抗體反應，而將抗體定位檢測出來。

生物幫上面有的， 動物細胞培養(yǎng)，植物細胞培養(yǎng)，ES細胞（胚胎干細胞）培養(yǎng)，細胞懸浮培養(yǎng)，貼壁細胞培養(yǎng)。

2.單克隆抗體中兩次篩選分別是什么方法

第二次篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞，用連續(xù)注射抗原，下面具體介紹一下：

1、在實際免疫過程中，由于采用連續(xù)注射抗原的方法，且一種抗原決定簇刺激機體形成相對應的一種效應B淋巴細胞，因此，從小鼠脾臟中取出的效應B淋巴細胞的特異性是不同的，經(jīng)HAT培養(yǎng)液篩選的雜交瘤細胞特異性也存在差異，所以必須從雜交瘤細胞群中篩選出能產(chǎn)生針對某一預定抗原快定簇的特異性雜交瘤細胞；

2、通常采用有限稀釋克隆細胞的方法，將雜交瘤細胞多倍稀釋，接種在多孔的細胞培養(yǎng)板上，使每一孔含一個或幾個雜交瘤細胞（理論上30%的孔中細胞數(shù)為0時，才能保證有些孔中是單個細胞），再由這些單細胞克隆生長，最終選出分泌預定特異抗體的雜交細胞株進行擴大培養(yǎng)。

拓展資料：

單克隆抗體是由單一B細胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體，稱為單克隆抗體。通常采用雜交瘤技術(shù)來制備，雜交瘤（hybridoma）抗體技術(shù)是在細胞融合技術(shù)的基礎(chǔ)上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為B細胞雜交瘤。

參考資料：單克隆抗體百度百科：網(wǎng)頁鏈接

3.自身抗體的檢測方法有哪些

檢測自身抗體的方法有多種，包括間接免疫熒光法、顆粒凝集法、酶聯(lián)免疫吸附試驗、放射免疫法、免疫雙擴散法、參比對流免疫電泳法、免疫印跡法、免疫斑點法、膠體金標斑點免疫滲濾法以及速率免疫比濁法等，間接免疫熒光法即適用于檢測針對原位成分也適用于可溶性成分的抗體，其余各法均適用于針對可溶性成分的抗體，可根據(jù)臨床需要及醫(yī)院條件去選用。

以下介紹常用的幾種。 （1）間接免疫熒光法（IIF）這是進行抗核抗體、抗核仁抗體和抗胞漿抗體篩選檢測的最有效方法。

在些檢測系統(tǒng)中，以組織培養(yǎng)細胞和器官的冷凍片切為反應底物。 （2）免疫雙擴散法（ID）免疫雙擴散法過去稱為“Ouchterlony試驗”是最早用于鑒定系統(tǒng)性自身免疫性疾病中自身抗體特異性的檢測系統(tǒng)。

在這些系統(tǒng)中，瓊脂凝膠是血清中抗體擴散從相反方向擴散過來的抗原相遇的介質(zhì)，在抗原與抗體間形成沉淀線。鑒定抗原抗體系統(tǒng)時需標準參照血清。

當二者相同時，兩條沉淀線在瓊脂凝膠上形成一條連續(xù)的沉淀線。免疫擴散中形成的沉淀線可用來鑒定如抗Sm、RNP、SS-B抗體系統(tǒng)及許多前述的可沉淀性抗原抗體系統(tǒng)。

（3）對流免疫電泳（CIE）對流免疫電泳是免疫擴散的改良試驗，采用電泳以加速抗原、抗體彼此向?qū)Ψ揭苿拥乃俣?，從而僅在幾小時內(nèi)便可形成沉淀線，而免疫雙擴散法則需1~2天的時間。在CIE中僅能檢出與抗原相比為酸性等電點的抗體，但對流免疫電泳很易檢出抗DNA、Sm、RNP和SS-B的自身抗體。

（4）免疫印跡法免疫印跡法（Westernblotting,WB）已廣泛用于測定自身抗體。在免疫印跡法中，將抗原電泳入聚丙烯酰胺凝膠，蛋白在電泳池中移動的速度與其相對分子大小成比例。

許多核內(nèi)、核仁內(nèi)和胞漿抗原可根據(jù)它們在該系統(tǒng)中的相對移動速度進行測定。與已知分子大小蛋白帶發(fā)生反應的抗體特異性可據(jù)此初步作出判斷。

（5）ELISA這一抗體檢測系統(tǒng)十分敏感，但卻非常依賴于抗原制品的純度。通常以部分純化的組織提取物或部分純化的重組抗原為底物。

抗體與這些抗原發(fā)生反應后，加入能結(jié)合抗體濃度的指示劑。該系統(tǒng)存在兩個問題，一個問題是部分純化組織提取物中含有一種以上的抗原或重組抗原，這些抗原可含有細菌產(chǎn)物（所檢測的血清可能含有針對這些細菌產(chǎn)物的抗體）。

另一個問題是隨著ELISA的敏感性增高，其特異性隨之降低。