細菌快速鑒定方法(細菌鑒定辦法,詳細些哦~~)

1.細菌鑒定辦法有哪些,詳細些哦~~

一 淀粉水解試驗 （一）實驗原理 細菌對大分子的淀粉、蛋白質(zhì)和脂肪不能直接利用，必須靠產(chǎn)生的胞外酶，如淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶將大分子物質(zhì)分解。

胞外酶能分泌擴散到細胞外，將物質(zhì)分解成小單位如糖、氨基酸、甘油與脂肪酸。這些小單位的物質(zhì)能被細菌吸收和利用。

水解過程可通過底物的變化來證明，如細菌水解淀粉的區(qū)域，用碘測定不再產(chǎn)生藍色；水解明膠可觀察到明膠被液化；脂肪水解后產(chǎn)生脂肪酸改變培養(yǎng)基的pH，其中的中性紅指示劑使培養(yǎng)基從淡紅色變?yōu)樯罴t色。（二）實驗方法 將淀粉培養(yǎng)基溶化后，冷至45℃左右，以無菌操作制成平板。

取18-24h的純培養(yǎng)物點于平板上，每皿可點種3-5個菌株，適溫培養(yǎng)2-4d，形成菌落后，在平板上滴加盧戈氏碘液，以鋪滿菌落周圍為度，平板成藍色。如果菌落周圍有無色透明圈出現(xiàn)，說明淀粉已經(jīng)被水解，實驗為陽性，否則為陰性。

透明圈的大小一般說明水解淀粉的能力。（三）實驗試劑的配制 肉湯蛋白胨瓊脂成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，瓊脂17g，蒸餾水1000mL,pH7.2。

淀粉培養(yǎng)基制法：在肉湯蛋白胨瓊脂中添加0.2%的可溶性淀粉，校正pH值至7.6，分裝三角瓶，121℃ 20min滅菌備用。盧戈氏（Lugol）碘液：碘片1g，碘化鉀2g，蒸餾水300ml，先將碘化鉀溶解在少量水中，再將碘片溶解在碘化鉀溶液中，混勻，定容。

二 糖發(fā)酵試驗（一）實驗原理 單糖發(fā)酵是將葡萄糖，乳糖或麥芽糖等分別加入蛋白胨水培養(yǎng)基內(nèi)，使其最終濃度為0.75-1%。并加入一定量酚紅指示劑及小倒管，制成單糖發(fā)酵管，接種細菌經(jīng)37℃培養(yǎng)18-24小時，若能分解糖產(chǎn)酸則酚紅指示劑由紅變黃，若能分解甲酸有CO2和H2等氣體形成，小倒管內(nèi)則聚集有氣泡；不分解，則指示劑不變色。

（二）實驗材料 1.菌種：大腸桿菌，傷寒桿菌18-24小時瓊脂斜面培養(yǎng)物。 2.培養(yǎng)基：葡萄糖發(fā)酵管，乳糖發(fā)酵管等。

（三）實驗方法1.將傷寒桿菌，大腸桿菌按照液體接種方法分別接種于葡萄糖及乳糖發(fā)酵管內(nèi)。 2.置37℃孵箱培養(yǎng)18-24小時。

3.觀察結(jié)果：由于一些細菌能分解某種糖類產(chǎn)酸，所以培養(yǎng)基中pH下降到7.0以下，在酚紅指示劑的顯示下，培養(yǎng)基顏色由紅變黃。產(chǎn)酸者以“+”表示，如果同時產(chǎn)生氣體，則培養(yǎng)基中小倒管內(nèi)有氣泡出現(xiàn)，此乃產(chǎn)酸又產(chǎn)氣，以“⊕”表示，不分解，則指示劑不變色，用“-”表示。

（四）實驗結(jié)果 傷寒桿菌 大腸桿菌 葡萄糖 + ⊕ 乳 糖 - ⊕ （五）實驗試劑的配制1.單糖發(fā)酵管的制備： 成分：蛋白胨水培養(yǎng)基 100ml ,0.2%酚紅 1ml ，所需糖（葡萄糖或乳糖）0.75-1g 制法： （1）將上述成分溶化，混勻分裝于內(nèi)含有倒置小玻璃管的小試管中，每管約2ml，加塞。 （2）小倒管排氣，滅菌（8-10磅，20-30分鐘），貯存?zhèn)溆谩?/p>

用途：供單糖發(fā)酵試驗用。 2.0.2%酚紅配制法 酚紅（phenol red）0.2g ,0.lmol/LNaOH 8ml ，蒸餾水 92ml 將酚紅入研缽徐徐加入0.lmol/LNaOH研磨，再補足蒸餾水即成。

若需長時間保存，可高壓滅菌后貯存?zhèn)溆谩?三 甲基紅（M.R）試驗（一）實驗原理 某些細菌如大腸桿菌等分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，繼而分解為甲酸、乙酸、乳酸等，使培養(yǎng)基pH值降至4.5以下，加入甲基紅指示劑呈紅色，此為陽性反應(yīng)；若產(chǎn)酸量少或產(chǎn)生的酸進一步轉(zhuǎn)化為醇、醛、氣體和水等，則培養(yǎng)基的酸堿度仍在pH 6.2以上，加入甲基紅指示劑呈現(xiàn)黃色，為陰性反應(yīng)。

（二）實驗材料1. 菌種：大腸桿菌，產(chǎn)氣桿菌18-24h瓊脂斜面培養(yǎng)物。 2. 培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基。

3. 試劑：甲基紅試劑。 （三）實驗方法1. 分別將大腸桿菌，產(chǎn)氣桿菌接種于兩支葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中。

2. 置37℃培養(yǎng)2-3天取出，分別滴加甲基紅試劑2-3滴，混勻，觀察結(jié)果。 （四）實驗結(jié)果 大腸桿菌：+，產(chǎn)氣桿菌：-。

（五）實驗試劑的配制1.甲基紅試劑的配制 甲基紅 0.04g, 95%酒精 60ml ， 蒸餾水 40ml 。先使甲基紅溶解于酒精中，再加入蒸餾水，混合，搖勻即成。

2.葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)物 成分：蛋白胨5g 葡萄糖5g 制法： （1）將上述成分溶解于蒸餾水中。 （2）調(diào)節(jié)pH至7.6，用濾紙過濾除渣。

（3）分裝中試管，每管約3-4ml，滅菌后備用。 用途：供甲基紅及V-P試驗用。

四 產(chǎn)吲哚（indole）試驗（一）實驗原理 某些細菌如大腸桿菌，變形桿菌等具有色氨酸酶，能分解蛋白胨水培養(yǎng)基中的色氨酸，產(chǎn)生靛基質(zhì)（無色吲哚），再與歐立希試劑（對二甲基氨基苯甲醛）反應(yīng)，形成紅色化合物—玫瑰吲哚，即為陽性反應(yīng)。 （二）實驗材料1. 菌種：大腸桿菌，傷寒桿菌18-24小時瓊脂斜面培養(yǎng)物。

2. 培養(yǎng)基：蛋白胨水培養(yǎng)基。 3. 試劑，歐立希（Ehrlich）試劑（對二甲基氨基苯甲醛） （三）實驗方法1. 分別將大腸桿菌，傷寒桿菌接種于兩支蛋白胨水培養(yǎng)基中。

2. 置37℃培養(yǎng)2-3天后，每管沿管壁各加歐立希試劑0.5-1ml于培養(yǎng)液面上，待1-2分鐘后觀察結(jié)果：在交界面出現(xiàn)玫瑰紅色環(huán)即為吲哚試驗陽性，無紅色環(huán)即為陰性。 （四）實驗結(jié)果 大腸桿菌：+ ；傷寒桿菌：- 。

（五）實驗試劑的配制1.蛋白胨水培養(yǎng)基的制備 成分：蛋白胨10g 氯化鈉5g 蒸餾水1000ml 制法： （1）先用少量蒸餾水將蛋白胨和氯化鈉相混合溶解，再加足蒸餾水量。 。

2.細菌鑒定辦法有哪些,常見細菌的鑒定辦法就可以

細菌的鑒定通過分離培養(yǎng)獲得的病原菌，必須達到不含有其他微生物的純培養(yǎng)程度，才能進行系統(tǒng)鑒定。

系統(tǒng)鑒定就是通過病原菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)、生長特性、抗原性和病原性等檢測，并用已知標(biāo)準(zhǔn)免疫血清確定分離細菌的屬、種和型。微生物鑒定的程序通常是根據(jù)其形態(tài)，生長、生化特性等定種，最后根據(jù)抗原的免疫血清學(xué)檢查定型。

（一）形態(tài)學(xué)檢查 各種細菌的形態(tài)，在適宜的環(huán)境下是相對穩(wěn)定的。但環(huán)境的改變，如培養(yǎng)基條件的改變，抗生素和化學(xué)藥品的作用等，均可使細菌產(chǎn)生不規(guī)則的形態(tài)，并可出現(xiàn)細胞壁的缺陷和多樣性。

為此，在作細菌形態(tài)鑒定時，必須按被檢菌的生長要求，選擇適宜的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，以及適宜的培養(yǎng)時間和檢查方法，才能作出正確的形態(tài)學(xué)鑒定。形態(tài)學(xué)檢查一般包括二方面：肉眼觀察和顯微鏡檢查。

1.肉眼觀察 肉眼觀察主要觀察細菌在固體、液體、半固體，鑒別培養(yǎng)基上的生長情況。在固體培養(yǎng)基上要觀察菌落形態(tài)、大小、顏色是否均勻一致，表面是光滑濕潤，還是干燥無光或呈皺紋狀，邊緣是整齊還是不規(guī)則，菌落是隆起、扁平，還是乳頭樣，是透明、半透明或不透明。

在液體培養(yǎng)基中，要觀察培養(yǎng)基是否呈均勻渾濁，管底有無沉淀，液面有無菌膜，是否產(chǎn)氣等。在半固體培養(yǎng)基上應(yīng)觀察細菌是否沿著接種線生長，是呈毛刷樣生長還是均勻生長，上下生長是否一致。

在鑒別培養(yǎng)基上，應(yīng)觀察其生長情況是否與預(yù)期的相一致，在血瓊脂培養(yǎng)基上還要觀察是否溶血及溶血圈的特點，在某些培養(yǎng)基上還要注意是否有臭味等。2.顯微鏡觀察 在作細菌個體形態(tài)學(xué)檢查時，要根據(jù)被檢菌的種類和檢查項目，選用相應(yīng)的染色方法，同時要注意選擇適合的培養(yǎng)基以及細菌培養(yǎng)的時間，才能達到預(yù)期的目的。

一般以18-24小時（生長時間長的細菌除外）的幼嫩培養(yǎng)菌為宜。例如，作革蘭氏染色檢查時，培養(yǎng)時間長的陳舊細菌，可能由陽性變?yōu)殛幮浴?/p>

作細菌運動性檢查時，液體培養(yǎng)基的幼嫩培養(yǎng)物（幾小時到十幾小時）最為適宜。作炭疽莢膜染色時，因炭疽桿菌在一般培養(yǎng)基上不形成莢膜，而在動物體內(nèi)形成明顯的莢膜，因此，應(yīng)先接種小鼠，取死亡動物的病料作涂片標(biāo)本鏡檢。

作鞭毛染色時，以液體培養(yǎng)基為宜。芽胞的形成，因細菌種類不同，往往對培養(yǎng)條件如培養(yǎng)基、空氣和培養(yǎng)時間等而異，但一般均要求較長時間。

鏡檢時除注意其基本形態(tài)結(jié)構(gòu)和大?。ㄒ脺y微計測量）外，還應(yīng)注意其排列狀態(tài)、菌端形狀、有無兩極染色、有無形成芽胞和莢胞等。必要時可用電鏡觀察其微細結(jié)構(gòu)。

3.常用的幾種染色方法 涂片用的載玻片需用清潔液洗凈、擦干、不留油質(zhì)，否則培養(yǎng)物不能均勻地推開。被檢材料如果是肉湯培養(yǎng)物，用鉑金耳環(huán)取一滴，均勻涂抹于載玻片上，涂抹的范圍約有手指甲大即可。

隨后，在酒精燈火焰上加熱使之固定（即火焰固定）；被檢材料如果是固體培養(yǎng)物，先滴一滴水（常用生理鹽水）于載玻片上，用鉑金耳環(huán)取少許培養(yǎng)物，在水滴中混勻，培養(yǎng)物不宜太多，菌體看不清楚。膿汁、淋巴液、乳汁也按同樣方法制備抹片。

血液和病變組織，直接涂抹在載玻片上，組織抹片也不能太厚，否則看不見細菌，細菌培養(yǎng)物抹片用火焰固定，組織抹片常用甲醇或甲醛固定。

3.細菌分子鑒定的方法有哪些

一般從DNA、RNA和蛋白質(zhì)這三個方面鑒定。將三種物質(zhì)分別提取出來，各自進行鑒定。鑒定的方法可以用你提到的這些。

1.核酸雜交：簡單的說，就是將需檢測的核酸與標(biāo)記的分子結(jié)合使得未知核酸可以被檢測到。

2.脈沖場凝膠電泳：利用電場讓不同大小的帶電DNA分子以不同的速度移動，從而將不同大小的分子分開?？煞蛛x10kb--10mb的DNA分子。

3.16S rRNA :16S rRNA所對應(yīng)的 16S rDNA基因在微生物基因組中具有高度保守性；對16S rDNA而言，如果出現(xiàn)3個堿基以上的差異就可以斷定細菌不屬于同一種屬。它具有高度的靈敏性，而且不需要培養(yǎng)，檢測指標(biāo)也很單一?？梢钥焖贆z測未知微生物或致病微生物。

4.RAPD：對整個未知序列的基因組進行多態(tài)性分析的分子技術(shù)。先進行PCR擴增，然后電泳分離染色，在紫外透視儀上檢測多態(tài)性。

5.質(zhì)粒質(zhì)譜分析法：我只了解過蛋白質(zhì)的質(zhì)譜分析技術(shù)，質(zhì)粒的沒有了解過。

蛋白質(zhì)：將蛋白質(zhì)酶解成小肽段并混合基質(zhì)，用激光將呈離子化氣體狀態(tài)的待測物噴射，經(jīng)電場到達檢測器，根據(jù)到達的時間分析肽段的分子質(zhì)量。

4.細菌的鑒定方法

一淀粉水解試驗：

細菌對大分子的淀粉、蛋白質(zhì)和脂肪不能直接利用，必須靠產(chǎn)生的胞外酶，如淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶將大分子物質(zhì)分解。胞外酶能分泌擴散到細胞外，將物質(zhì)分解成小單位如糖、氨基酸、甘油與脂肪酸。這些小單位的物質(zhì)能被細菌吸收和利用。水解過程可通過底物的變化來證明，如細菌水解淀粉的區(qū)域，用碘測定不再產(chǎn)生藍色；水解明膠可觀察到明膠被液化；脂肪水解后產(chǎn)生脂肪酸改變培養(yǎng)基的pH，其中的中性紅指示劑使培養(yǎng)基從淡紅色變?yōu)樯罴t色。

二糖發(fā)酵試驗：

單糖發(fā)酵是將葡萄糖，乳糖或麥芽糖等分別加入蛋白胨水培養(yǎng)基內(nèi)，使其最終濃度為0.75-1%。并加入一定量酚紅指示劑及小倒管，制成單糖發(fā)酵管，接種細菌經(jīng)37℃培養(yǎng)18-24小時，若能分解糖產(chǎn)酸則酚紅指示劑由紅變黃，若能分解甲酸有CO2和H2等氣體形成，小倒管內(nèi)則聚集有氣泡；不分解，則指示劑不變色。

三甲基紅（M.R）試驗：

某些細菌如大腸桿菌等分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，繼而分解為甲酸、乙酸、乳酸等，使培養(yǎng)基pH值降至4.5以下，加入甲基紅指示劑呈紅色，此為陽性反應(yīng)；若產(chǎn)酸量少或產(chǎn)生的酸進一步轉(zhuǎn)化為醇、醛、氣體和水等，則培養(yǎng)基的酸堿度仍在pH 6.2以上，加入甲基紅指示劑呈現(xiàn)黃色，為陰性反應(yīng)。

四產(chǎn)吲哚（indole）試驗等等，

這要你鑒定的細菌是什么分類了。

請采納！

5.鑒別細菌的五種方法

細菌鑒定是指將未知細菌按生物學(xué)特征放入系統(tǒng)中某一適當(dāng)位置和已知菌種比較其相似性，并通過對比分析方法確定細菌分類地位的過程。

細菌鑒定方法包括生化鑒定、核酸檢測、血清學(xué)鑒定、自動化儀器鑒定及質(zhì)譜技術(shù)等。細菌鑒定步驟在實驗室中，主要是根據(jù)所用的鑒定儀器特點、感染性疾病的類型、標(biāo)本種類、采集部位等因素建立具體的微生物學(xué)檢驗程序。

大致步驟如下。細菌鑒定方法1.生化鑒定是細菌鑒定中最重要的一種，主要是借助細菌對營養(yǎng)物質(zhì)分解能力的不同及其代謝產(chǎn)物的差異對細菌進行鑒定，包括蛋白質(zhì)分解產(chǎn)物試驗、觸酶試驗、糖分解產(chǎn)物試驗、氧化酶試驗、凝固酶試驗等。

2.血清學(xué)鑒定適用于含較多血清型的細菌，常用方法是玻片凝集試驗，并可用免疫熒光法、協(xié)同凝集試驗、對流免疫電泳、間接血凝試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗等方法快速、靈敏地檢測樣本中致病菌的特異性抗原。用已知抗體檢測未知抗原（待檢測的細菌），或用已知抗原檢測患者血清中的相應(yīng)抗細菌抗體及其效價。

血清學(xué)鑒定操作簡單快速，特異性高，可在生化鑒定基礎(chǔ)上為細菌鑒定提供確定診斷。3.分子生物學(xué)檢測適用于人工培養(yǎng)基不能生長、生長緩慢及營養(yǎng)要求高不易培養(yǎng)的細菌，檢測方法包括核酸擴增技術(shù)、核酸雜交、生物芯片及基因測序等。

常見的核酸擴增技術(shù)有聚合酶鏈反應(yīng)、連接酶鏈反應(yīng)等，主要用于耐甲氧西林、結(jié)核分枝桿菌等病原菌的檢測。核酸雜交有斑點雜交、原位雜交等，用于致病性大腸埃希菌、沙門菌、空腸彎曲菌等致病菌的檢測。

生物芯片包括基因芯片和蛋白質(zhì)芯片，主要是對基因、蛋白質(zhì)、細胞及其他生物進行大信息量分析的檢測技術(shù)。4.微生物自動鑒定系統(tǒng)鑒定可快速、準(zhǔn)確地對臨床近千種常見分離菌進行鑒定，目前已在臨床實驗室廣泛使用。

其中，細菌16S rRNA編碼基因已成為較理想的基因分離靶序列，逐漸成為臨床細菌鑒定、分離的金標(biāo)準(zhǔn)。5.質(zhì)譜技術(shù)是近年來發(fā)展起來的一種新型的軟電離生物質(zhì)譜，用于分析細菌的化學(xué)分類和鑒定，具有高靈敏度和高質(zhì)量檢測范圍的優(yōu)點。

主要是對核酸、蛋白質(zhì)、多肽等生物大分子串聯(lián)質(zhì)譜進行分析。

6.細菌的鑒定方法

去百度文庫，查看完整內(nèi)容> 內(nèi)容來自用戶：李長漢 1.2.1形態(tài)學(xué)特征按照東秀珠和蔡妙英編《常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊》（1999），中科院微生物所編著《一般細菌常用鑒定方法》（1978）的方法進行鑒定。

芽孢桿菌屬鑒定到種，參照了蔡妙英等譯《芽孢桿菌屬》（1980）的方法。（1）革蘭氏染色：挑選少許菌苔，涂布于干凈玻片的蒸餾水中，風(fēng)干固定，結(jié)晶紫染色（結(jié)晶紫2g，草酸銨0.8g,95%乙醇20 ml，加水至100 ml）1min，水洗后碘液（碘1g，碘化鉀2g，水300 ml）作用1min，水洗，脫色，用番紅O液染3min，水洗，風(fēng)干，光學(xué)顯微鏡觀察。

（2）鞭毛染色：將16~24h菌齡的菌苔在載玻片上的水滴中輕蘸幾下，將玻片傾斜，使菌液緩慢流到另一端，然后平放在空氣中干燥。干燥后滴甲液（丹寧酸5g,FeCl31.5g,15%福爾馬林2ml,1%NaOH 1ml，蒸餾水100 ml）染6~10min，水洗，干燥后，用乙液（2%AgNO3溶液）加熱復(fù)染30min，蒸餾水沖洗，干燥，鏡檢，菌體為深褐色，鞭毛為褐色。

（3）運動性：半固體瓊脂穿刺法，將菌種接在可使鑒定菌生長良好的培養(yǎng)基中，其中含0.3~0.6%的瓊脂。適溫培養(yǎng)，運動性可用透射光目測，如生長菌只生長在穿刺線上，邊緣十分清晰，則表明鑒定菌無運動性；如生長菌由穿刺線向四周呈云霧狀擴散，其邊緣呈云霧狀，則表示鑒定菌有運動性。

（4）芽孢染色：孔雀綠染色法。按革蘭氏染色涂片后，用飽和的孔雀綠水溶液（約1.2.2(。