對植物的培養(yǎng)方法方法(植物細(xì)胞培養(yǎng)的方法)

1.植物細(xì)胞培養(yǎng)的方法有哪些

植物組織培養(yǎng)一般分為以下幾種：

1、胚胎培養(yǎng)

指以從胚珠中分離出來的成熟或未成熟胚為外植體的離體無菌培養(yǎng)。

2、器官培養(yǎng)

指以植物的根、莖、葉、花、果等器官為外植體的離體無菌培養(yǎng)，如根的根尖和切段，莖的莖尖、莖節(jié)和切段，葉的葉原基、葉片、葉柄、葉鞘和子葉，花器的花瓣、雄蕊（花藥、花絲）、胚珠、子房、果實(shí)等的離體無菌培養(yǎng)。

3、組織培養(yǎng)

指以分離出植物各部位的組織（如分生組織、形成層、木質(zhì)部、韌皮部、表皮、皮層、胚乳組織、薄壁組織、髓部等），或已誘導(dǎo)的愈傷組織為外植體的離體無菌培養(yǎng)。這是狹義的植物組織培養(yǎng)。

4、細(xì)胞培養(yǎng)

指以單個游離細(xì)胞（如用果酸酶從組織中分離的體細(xì)胞，或花粉細(xì)胞，卵細(xì)胞）為接種體的離體無菌培養(yǎng)。

5、原生質(zhì)體培養(yǎng)。

指以除去細(xì)胞壁的原生質(zhì)體為外植體的離體無菌培養(yǎng)

組織培養(yǎng)的特點(diǎn)

1、培養(yǎng)條件可以人為控制

組織培養(yǎng)采用的植物材料完全是在人為提供的培養(yǎng)基和小氣候環(huán)境條件下進(jìn)行生長，擺脫了大自然中四季、晝夜的變化以及災(zāi)害性氣候的不利影響，且條件均一，對植物生長極為有利，便于穩(wěn)定地進(jìn)行周年培養(yǎng)生產(chǎn)。

2、生長周期短，繁殖率高

植物組織培養(yǎng)是由于人為控制培養(yǎng)條件，根據(jù)不同植物不同部位的不同要求而提供不同的培養(yǎng)條件，因此生長較快。另外，植株也比較小，往往20-30d為一個周期。所以，雖然植物組織培養(yǎng)需要一定設(shè)備及能源消耗，但由于植物材料能按幾何級數(shù)繁殖生產(chǎn)，故總體來說成本低廉，且能及時提供規(guī)格一致的優(yōu)質(zhì)種苗或脫病毒種苗。

3、管理方便，利于工廠化生產(chǎn)和自動化控制

植物組織培養(yǎng)是在一定的場所和環(huán)境下，人為提供一定的溫度、光照、濕度、營養(yǎng)、激素等條件，極利于高度集約化和高密度工廠化生產(chǎn)，也利于自動化控制生產(chǎn)。它是未來農(nóng)業(yè)工廠化育苗的發(fā)展方向。它與盆栽、田間栽培等相比省去了中耕除草、澆水施肥、防治病蟲等一系列繁雜勞動，可以大大節(jié)省人力、物力及田間種植所需要的土地

2.常用的植物培養(yǎng)方法有哪些

常用的植物培養(yǎng)方法除傳統(tǒng)的土壤培養(yǎng)法（土培法）外，還有一些人工培養(yǎng)法（無土栽培技 術(shù)）逐步在農(nóng)業(yè)科學(xué)研究和生產(chǎn)實(shí)踐中應(yīng)用，如溶液培養(yǎng)法（水培法）、砂基培養(yǎng)法（砂培法）、氣培法（氣栽法）和營養(yǎng)膜法（營養(yǎng)液膜技術(shù)）等。

① 水培法又稱溶液培養(yǎng)法，是在含有全部或部分營養(yǎng)元素的溶液中栽培植物的方法。 ② 砂培法或砂基培養(yǎng)法是以洗凈的石英砂、珍珠巖、蛭石或玻璃球等（中性物質(zhì)）作為支 持物，加入含有全部或部分營養(yǎng)元素的溶液來栽培植物的方法。

③ 氣培法或氣栽法。將根系置于營養(yǎng)液氣霧中栽培植物的方法。

④ 營養(yǎng)膜法或營養(yǎng)液膜技術(shù)。將植物培養(yǎng)在一個稍微傾斜的長槽中，讓溶液向下流，形成 一層通氣良好的營養(yǎng)液的薄膜。

人工培養(yǎng)法研究植物營養(yǎng)的最大優(yōu)點(diǎn)是，能人為地控制營養(yǎng)液的成分，通過加入或除去某些元 素，觀察植物的生長發(fā)育情況及缺素癥狀，可以判定某元素是否屬于必需元素以及它的生理作用。 人工培養(yǎng)法自誕生之日到現(xiàn)在已有140多年的歷史了，它不單單可以用于判斷植物的必需元 素和缺素癥狀，而且已成為一種切實(shí)可行的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)手段。

20世紀(jì)70年代以來發(fā)展的間歇水培 法、氣培法以及營養(yǎng)液膜技術(shù)已用于蔬菜和花丼，以及某些農(nóng)作物（如馬鈴薯微型薯的快繁）的 生產(chǎn)栽培。目前，美國已把無土栽培列為當(dāng)代十大技術(shù)發(fā)展之一。

3.傳統(tǒng)植物培養(yǎng)方法

1、有性繁殖

有性繁殖也稱種子繁殖，是用花卉種子進(jìn)行繁殖的過程。近年來也有將種子中的胚取出，進(jìn)行培養(yǎng)以形成新株，稱為"胚培養(yǎng)"方法。大部分一、二年生草花和部分多年生草花常采用種子繁殖，這些種子大部分為f1代種子，具有優(yōu)良的性狀，但需要每年制種。如翠菊、雞冠花、一串紅、金魚草、金盞菊、百日草、三色堇、矮牽牛等。

2、無性繁殖

無性繁殖也稱營養(yǎng)繁殖，是用花卉營養(yǎng)體的一部分（根、莖、葉、芽）為材料，利用植物細(xì)胞的全能性而獲得新植物的繁殖方法。通常包括分生、扦插、嫁接、壓條等方法。溫室木本花卉、多年生花卉、多年生一、二年生栽培的花卉常用分生、扦插方法繁殖。如一品紅、變?nèi)~木、金盞菊、矮牽牛、瓜葉菊等。仙人掌多漿植物也常采用扦插、嫁接繁殖。

4.植物培養(yǎng)技術(shù)有哪些

1、植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計原則： ①實(shí)驗(yàn)室最好設(shè)緩沖間或走道，以方便出入，減少污染； ②培養(yǎng)室最好建在南面，并設(shè)大窗戶以利自然采光，減少能耗； ③培養(yǎng)室及接種室均不宜過大，并裝滑動門，接種室還需設(shè)一緩沖間，以減少污染。

2、決定組培實(shí)驗(yàn)室規(guī)模的因素： ①所要進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)的性質(zhì)； ②所能得到的經(jīng)費(fèi)的多少。 3、組培實(shí)驗(yàn)室的布局： 基本要求：便于隔離、便于操作、便于滅菌、便于觀察。

布局：一般按自然工作程序先后，安排成一條連續(xù)的生產(chǎn)線，應(yīng)避免交叉或倒排。 二、植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的組成及其功能： 1.基本實(shí)驗(yàn)室： ①準(zhǔn)備室：可分為洗滌室、試劑室、培養(yǎng)基室、滅菌室等 功能：進(jìn)行一切與實(shí)驗(yàn)有關(guān)的準(zhǔn)備工作，包括器皿洗滌、試劑的配制及培養(yǎng)基的制備、滅菌和貯存等。

要求：寬敞明亮，通風(fēng)條件好。 設(shè)備：洗滌池、工作臺、試劑柜、冰箱、天平、微波爐、烘箱、高蒸汽滅菌鍋等。

②接種室：也可置于準(zhǔn)備室內(nèi)僻靜的一角 功能：進(jìn)行無菌操作。 要求：房間一般不宜過大，需設(shè)一緩沖間，要求封閉性好，干燥清潔，能較長時間保持無菌。

設(shè)備：超凈工作臺、空調(diào)等。 ③培養(yǎng)室： 功能：對離體材料進(jìn)行控制培養(yǎng)。

要求：能控制光照和溫度（25℃±2℃），防止微生物感染，保持干燥和清潔。 設(shè)備：培養(yǎng)架、搖床、空調(diào)等。

2.輔助實(shí)驗(yàn)室： ①馴化移栽室： 功能：提供組培苗煉苗的環(huán)境。 要求：能控溫調(diào)濕、控光通風(fēng)。

②育苗溫室或大棚： 功能：生產(chǎn)商品苗。 要求：能控制光照和濕度，并具一定的保溫性能。

③細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)室：觀察室 功能：對培養(yǎng)材料進(jìn)行細(xì)胞學(xué)鑒定和研究。 要求：清潔、明亮、干燥，使各種光學(xué)儀器不受潮濕和灰塵污染。

④攝影室及暗室：在有條件的情況下建立。 功能：進(jìn)行培養(yǎng)材料的攝影記錄和膠片沖印。

⑤生化分析室：在以培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)物為主要目的的實(shí)驗(yàn)室中，應(yīng)建立相應(yīng)的分析化驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室，以便于對培養(yǎng)物的有效成分隨時進(jìn)行取樣檢查。 三、常用儀器設(shè)備： 1、基本設(shè)備：冰箱、天平、酸度計、電蒸餾水器、純水器、電爐、培養(yǎng)基分裝器、攪拌器、恒溫水浴鍋等。

2、滅菌設(shè)備：蒸汽壓力滅菌鍋、干熱消毒柜、過濾滅菌裝置、噴霧消毒器、紫外燈。 3、無菌操作設(shè)備：凈化工作臺、接種箱。

4、光溫控制設(shè)備：時間程序控制器、空調(diào)及溫度感應(yīng)器等。 5、細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備：培養(yǎng)設(shè)備根據(jù)需要而定，包括培養(yǎng)架、培養(yǎng)箱、搖床、生物反應(yīng)器等。

6、細(xì)胞學(xué)鑒定設(shè)備：光學(xué)研究顯微鏡、實(shí)體顯微鏡、倒置顯微鏡。 7、其它設(shè)備：如果有條件和需要可配制攝影設(shè)備、生化分析設(shè)備等。

四、常用工具： 1、培養(yǎng)容器： （1）玻璃容器：如培養(yǎng)皿、三角瓶、試管、廣口瓶、罐頭瓶等，要求無色、透光，不產(chǎn)生折射。 （2）塑料容器：材質(zhì)輕、不易破碎、制作方便 ①一次性使用容器：如聚乙烯、聚丙烯材料，要求透光、無毒； ②可重復(fù)使用容器：如聚丙烯、聚碳酸酯材料，要求耐高溫高壓。

2、一般容器：燒杯、廣口瓶、試劑瓶等 3、計量器皿：量筒、容量瓶、移液管等 4、金屬用具：鑷子、剪刀、解剖刀、接種針、接種鏟等 5、其他用具：滴瓶、玻璃棒、漏斗、注射器、周轉(zhuǎn)筐、試管架、酒精燈等。

5.植物組織培養(yǎng)的步驟有哪些

組織培養(yǎng)的方法和步驟要根據(jù)培養(yǎng)目的適當(dāng)選取材料，選擇原則：易于誘導(dǎo)、帶菌少。

要選取植物組織內(nèi)部無菌的材料。這一方面要從健壯的植株上取材料，不要取有傷口的或有病蟲的材料。

另一方面要在晴天，最好是中午或下午取材料，決不要在雨天、陰天或露水未干時取材料。因?yàn)榻训闹仓旰颓缣旃夂虾粑⒌慕M織，有自身消毒作用，這種組織一般是無菌的。

培養(yǎng)材料的消毒 從外界或室內(nèi)選取的植物材料，都不同程度地帶有各種微生物。這些污染源一旦帶人培養(yǎng)基，便會造成培養(yǎng)基污染。

因此，植物材料必須經(jīng)嚴(yán)格的表面滅菌處理，再經(jīng)無菌操作手續(xù)接到培養(yǎng)基上。第一步，將采來的植物材料除去不用的部分，將需要的部分仔細(xì)洗干凈，如用適當(dāng)?shù)乃⒆拥人⑾础?/p>

把材料切割成適當(dāng)大小，即滅菌容器能放人為宜。置自來水龍頭下流水沖洗幾分鐘至數(shù)小時，沖洗時間視材料清潔程度而宜。

易漂浮或細(xì)小的材料，可裝入紗布袋內(nèi)沖洗。流水沖洗在污染嚴(yán)重時特別有用。

洗時可加入洗衣粉清洗，然后再用自來水沖凈洗衣粉水。洗衣粉可除去輕度附著在植物表面的污物，除去脂質(zhì)性的物質(zhì)，便于滅菌液的直接接觸。

當(dāng)然，最理想的清洗物質(zhì)是表面活性物質(zhì)—吐溫。第二步是對材料的表面浸潤滅菌。

要在超凈臺或接種箱內(nèi)完成，準(zhǔn)備好消毒的燒杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、無菌水、手表等。用70%酒精浸10~30s。

由于酒精具有使植物材料表面被浸濕的作用，加之70%酒精穿透力強(qiáng)，也很易殺傷植物細(xì)胞，所以浸潤時間不能過長。有一些特殊的材料，如果實(shí)、花蕾、包有苞片、苞葉等的孕穗，多層鱗片的休眠芽等等，以及主要取用內(nèi)部的材料，則可只用70%酒精處理稍長的時間。

處理完的材料在無菌條件下，待酒精蒸發(fā)后再剝除外層，取用內(nèi)部材料。第三步是用滅菌劑處理。

表面滅菌劑的種類較多，可根據(jù)情況選取1—2種使用見表。第四步是用無菌水涮洗，涮洗要每次3min左右，視采用的消毒液種類，涮洗3-l0次左右。

無菌水涮洗作用是免除消毒劑殺傷植物細(xì)胞的副作用注意：①酒精滲透性強(qiáng)，幼嫩材料易在酒精中失綠，所以浸泡時間要短，防止酒精殺死植物細(xì)胞。②老熟材料，特別是種子等可以在酒精中浸泡時間長一些，如種子可以浸泡5分鐘。

③升汞的滲透力弱，一般浸泡10分鐘左右，對植物材料的殺傷力不大。④漂白粉容易導(dǎo)致植物材料失綠，所以對于幼嫩材料要慎用。

⑤在消毒液中加入濃度為0.08—0.12%的吐溫20或80（一種濕潤劑），可以降低植物材料表面的張力，達(dá)到更好的消毒效果。滅菌劑 使用濃度（%） 持續(xù)時間（min） 去除的難易 效果次氯酸鈣 9~10 5~30 易 很好次氯酸鈉 2 5~30 易 很好氯化汞 0.1~1 5~8 較難 最好抗菌素 4~50mg/L 30~60 中 較好制備外植體 將已消毒的材料，用無菌刀、剪、鑷等，在無菌的環(huán)境下，剝?nèi)パ康镊[片、嫩枝的外皮和種皮胚乳等，葉片則不需剝皮。

在操作中嚴(yán)禁用手觸動材料。接種和培養(yǎng) （一）接種在無菌壞境下，將切好的外植體立即接在培養(yǎng)基上，每瓶接種1-2個，以防止交叉污染。

（二）封口接種后，瓶、管用無菌藥棉或蓋封口，培養(yǎng)皿用無菌膠帶封口。 （三）溫度培養(yǎng)基大多應(yīng)保持在25℃左右，但要因花卉種類及材料部位的不同而區(qū)別對待。

增殖外植體的增殖是組培的關(guān)鍵階段，在新梢等形成后為了擴(kuò)大繁殖系數(shù)，需要繼代培養(yǎng)。把材料分株或切段轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中，增殖培養(yǎng)基一般在分化培養(yǎng)基上加以改良，以利于增殖率的提高。

增殖1個月左右后，可視情況進(jìn)行再增殖。根的誘導(dǎo)繼代培養(yǎng)形成的不定芽和側(cè)芽等一般沒有根，必須轉(zhuǎn)到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)。

1個月后即可獲得鍵壯根系。組培苗的煉苗移栽 試管苗從無菌到光、溫、濕穩(wěn)定的環(huán)境進(jìn)入自然環(huán)境，必須進(jìn)行煉苗。

一般移植前，先將培養(yǎng)容器打開，于室內(nèi)自然光照下放3天，然后取出小苗，用自來水把根系上的營養(yǎng)基沖洗干凈，再栽入已準(zhǔn)備好的基質(zhì)中，基質(zhì)使用前最好消毒。移栽前要適當(dāng)遮蔭，加強(qiáng)水分管理，保持較高的空氣濕度（相對濕度98%左右），但基質(zhì)不宜過濕，以防爛苗。

植物組織培養(yǎng)方法 1 MS培養(yǎng)基的配制包括以下步驟.培養(yǎng)基母液的配制和保存 MS培養(yǎng)基含有近30種營養(yǎng)成分，為了避免每次配制培養(yǎng)基都要對這幾十種成分進(jìn)行稱量，可將培養(yǎng)基中的各種成分，按原量的20倍或200倍分別稱量，配成濃縮液，這種濃縮液叫做培養(yǎng)基母液.這樣每次使用時，取其總量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL)，加水稀釋，制成培養(yǎng)液.現(xiàn)將制備培養(yǎng)基母液所需的各類物質(zhì)的量列出，供配制時使用.大量元素（母液Ⅰ） mg/L NH4NO3 33 000 KNO3 38 000 CaCl2·2H2O 8 800 MgSO4·7H2O 7 400 KH2PO4 3 400 微量元素（母液Ⅱ） KI 166 H3BO3 1 240 MnSO4·4H2O 4 460 ZnSO4·7H2O 1 720 Na2MoO4·2H2O 50 CuSO4·5H2O 5 CoCl2·6H2O 5 鐵鹽（母液Ⅲ） FeSO4·7H2O 5 560 Na2-EDTA·2H2O 7 460 有機(jī)成分（母液Ⅳ） ⅣA 肌醇 20 000 ⅣB 煙酸 100 鹽酸吡哆醇（維生素B6） 100 鹽酸硫胺素（維生素B1） 100 甘氨酸 400 以上各種營養(yǎng)成分的用量，除了母液Ⅰ為20倍濃縮液外，其余的均為200倍濃縮液.上述幾種母液都要。