核酸的提取和制備通常還用哪些方法(PCR反應(yīng)模板核酸的提取制備方法是什么)

1.PCR反應(yīng)模板核酸的提取制備方法是什么

異硫氰酸胍提取編輯異硫氰酸胍法提取制備模板核酸此法主要用于RNA的提取.標(biāo)本為組織細(xì)胞及血清等.1.異硫氰酸胍消化液異硫氰酸胍4mol/L檸檬酸鈉（PH7.0）25mmol/L十二烷基肌酸鈉0.5%β巰基乙醇0.1mol/L2.消化方法：用50~100ul細(xì)胞懸液及血清，加等體積的異硫氰酸胍消化液振混勻后，或65℃1小時，或室溫放置數(shù)分鐘，然后加1/10體積的3mmol/LpH5.2的醋酸鈉緩沖液，再加等體積的酚：氯仿，用力振搖約10s,10000r/min，離心5min，取上清加等體積異丙醇20℃放置3h后，14000r/min離心15min，沉定用75%冰冷乙醇離心洗滌1~2次，真空干燥，沉淀用TE緩沖液溶解即可用于逆轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增，或放20℃保存。

2.核酸純化試劑的使用方法和注意事項有哪些

使用方法因廠家不同而不同，下面是一氪生物技術(shù)的核酸純化試劑使用方法及注意事項，供參考：

步驟一：使用無水乙醇與純化水配制70%乙醇備用。

步驟二：從2-8℃冰箱中取出磁珠懸浮液，在室溫條件下震蕩混勻，平衡30min。

步驟三：將充分震蕩混勻平衡后的磁珠加入待純化酶反應(yīng)或PCR反應(yīng)產(chǎn)物溶液中。磁珠加入體積分別參考圖1和圖2，若待純化產(chǎn)物體積不足，可用純化水或10mM Tris-HCl(pH8.0)補(bǔ)充至相應(yīng)體積。

步驟四：用移液器反復(fù)吹打10次，將磁珠懸浮液和PCR產(chǎn)物或者酶反應(yīng)物充分混勻，室溫條件下靜置5min。

步驟五：將反應(yīng)板放置在磁力架上，靜置2min，待溶液澄清后將上清吸走，轉(zhuǎn)入廢液桶內(nèi)。

步驟六：向反應(yīng)板中加入200μL新鮮配置的70%的乙醇，室溫靜置30s。靜置結(jié)束后將乙醇吸走，轉(zhuǎn)入廢液桶內(nèi)。操作環(huán)節(jié)不可將反應(yīng)板從磁力分離架上拿下或?qū)⒋胖榇瞪ⅰ?/p>

步驟七：重復(fù)步驟六。

步驟八：保持反應(yīng)板置于磁力架上狀態(tài)，室溫開蓋晾干2min以去除殘存的乙醇。

步驟九：將反應(yīng)板從磁力架上取下來，加入50μL洗脫液，移液器反復(fù)吹打10次混勻，室溫靜置3min。洗脫液加入量根據(jù)實際需要而定，但應(yīng)不少于5μL。

步驟十：將反應(yīng)板重新放置在磁力架上，室溫靜置1min，上清液即純化后的DNA產(chǎn)物。

步驟十一：將上清液轉(zhuǎn)入新的反應(yīng)管或者反應(yīng)板中，供下一步反應(yīng)或檢測使用。

3.要獲取完整核酸需要采取什么措施

在dna的提取過程中防止脫氧核糖核酸酶的水解作用，應(yīng)采取哪些措施

相同點：都能以DNA為模板，從5'向3'進(jìn)行核苷酸或脫氧核苷酸的聚合反應(yīng)。

不同點

1、作用底物不同。RNA聚合酶底物是NTP;DNA聚合酶底物是dNTP。

2、RNA聚合酶作用不需要引物，而DNA聚合酶作用需要引物。

3、RNA聚合酶本身具有一定的解旋功能，而DNA聚合酶沒有，當(dāng)需要解開雙鏈的時候要解旋酶和拓?fù)洚悩?gòu)酶的幫助。

4、RNA聚合酶只具有5'到3'端的聚合酶活性，而DNA聚合酶不僅有5'到3'端的聚合酶活性，還具有3'到5'端的外切酶活性。保證DNA復(fù)制時候校對，所以復(fù)制的忠實性高于轉(zhuǎn)錄的。

5、RNA聚合酶通常作用于轉(zhuǎn)錄過程；DNA聚合酶通常作用于DNA復(fù)制過程

4.提取制備RNA常用的方法有哪幾種,各有何優(yōu)缺點

常見的RNA提取方法有苯酚法、陰離子去污劑法、LiCl一尿素法、改良的Gomez法、異硫氫酸胍法、CTAB法、熱硼酸法及改良熱硼酸法、TRIZOL試劑快速提取法。

RNA提取時，就變性劑的選擇來說，CTAB(CTAB法)比異硫氰酸胍（RIZOL試劑法）和 SDS（改良熱硼酸法）更有效；就CTAB法來說，由于以CTAB為變性劑，同時加入PVP和β一巰基乙醇共同作用變性蛋白、抑制RNase的活性，使用無水乙醇或異丙醇沉淀雜蛋白和總核酸等，然后再選擇性地分離出RNA。

5.DNA的提取方法有多少種

DNA的提取方法有7種：酚抽提法、甲酰胺解聚法、玻璃棒纏繞法、異丙醇bai沉淀法、表面活性劑快速制備法、加熱法快速制du備、堿變性快速制備。

DNA的提取原則

1、保證核酸一級結(jié)構(gòu)的完整性；

2、核酸樣品中不應(yīng)存在對酶有抑制作用的有機(jī)溶劑和過高濃度的金屬離子；

3、其他生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子的污染應(yīng)zhi降低到最低程度；

4、其他核酸分子，如RNA，也應(yīng)盡量去除。

擴(kuò)展資料

提取daoDNA的注意事項

1、各操作內(nèi)步驟要輕柔，盡量減少DNA的人為降解。

2、注意防止非核酸類成分干擾。

3、要減少DNA的降解，促進(jìn)DNA與蛋白等的分相及DNA沉淀。

4、提取DNA過程中所用到的試劑和器材容要通過高壓烤干等辦法進(jìn)行無核酸酶化處理。

5、所有試劑均用高壓滅菌雙蒸水配制。

參考資料來源：百度百科-dna提取

6.在核酸的分離提取和純化過程中,都利用核酸的哪些生物學(xué)特性

核酸（nucleic acid）是遺傳信息的攜帶者，是基因表達(dá)的物質(zhì)基礎(chǔ)。無論是進(jìn)行核酸結(jié)構(gòu)還是功能研究，首先需要對核酸進(jìn)行分離和純化。核酸樣品質(zhì)量將直接關(guān)系到實驗的成敗。核酸分離、純化原則：1.保持核酸分子一級結(jié)構(gòu)的完整性。因為遺傳信息全部儲存在一級結(jié)構(gòu)之中，核酸的—級結(jié)構(gòu)還決定其高級結(jié)構(gòu)的形式以及和其他生物大分子結(jié)合的方式。2.分離核酸原則：1）溫度不要過高；2）控制pH值范圍（pH值5-9）; 3）保持一定離子強(qiáng)度； 4）減少物理因素對核酸的機(jī)械剪切力.

在核酸分離提取中最重要的是要防止核酸的生物降解，細(xì)胞內(nèi)或外來的各種核酸酶能消化核酸鏈中的磷酸二酯鍵，破壞核酸一級結(jié)構(gòu)。所用器械和一些試劑需高溫滅菌，提取緩沖液中需加核酸酶抑制劑。

常用的DNA酶抑制劑有1.金屬離子螯合劑：如EDTA-Na2（乙二胺四乙酸二鈉）、8-羥基喹啉。2.陰離于型表面活性劑如SDS，該試劑除對核酸酶有抑制作用外，還能使蛋白質(zhì)變性，并與變性蛋白結(jié)合成帶負(fù)電荷的復(fù)合物，該復(fù)合物在高鹽溶液中沉淀。

常用的RNA酶（RNAase）抑制劑有：1.皂土（bentonite ）作用機(jī)制：皂土帶負(fù)電荷，能吸附RNase，使其失活。2. DEPC（二乙基焦碳酸鹽） （C2H5OCOOCOOC2H5）粘性液體，很強(qiáng)的核酸酶抑制劑。作用機(jī)制：與蛋白質(zhì)中His結(jié)合使蛋白變性。

以上答案希望對你有幫助。

7.DNA的提取方法有多少種

DNA的提取方法有7種：酚抽提法、沉淀法、表面活性劑快速制備法、加熱法快速制備、堿變性快速制備。

DNA的提取原則 1、保證核酸一級結(jié)構(gòu)的完整性； 2、核酸樣品中不應(yīng)存在對酶有抑制作用的有機(jī)溶劑和過高濃度的金屬離子； 3、其他生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子的污染應(yīng)降低到最低程度； 4、其他核酸分子，如RNA，也應(yīng)盡量去除。 擴(kuò)展資料提取DNA的注意事項 1、各操作步驟要輕柔，盡量減少DNA的人為降解。

2、注意防止非核酸類成分干擾。 3、要減少DNA的降解，促進(jìn)DNA與蛋白等的分相及DNA沉淀。

4、提取DNA過程中所用到的試劑和器材要通過高壓烤干等辦法進(jìn)行無核酸酶化處理。 5、所有試劑均用高壓滅菌雙蒸水配制。

參考資料來源：百度百科-dna提取。

8.提取DNA的方法有哪些

DNA提取的幾種方法

(1).濃鹽法

利用RNP和DNP在電解溶液中溶解度不同，將二者分離，常用的方法是用1M 氯 納提取化鈉抽提，得到的DNP粘液與含有少量辛醇的 氯仿一起搖蕩，使乳化，再離心除去蛋白質(zhì)，此時蛋白質(zhì)凝膠停留在水相及氯仿相中間，而DNA位于上層水相中，用2倍體積95%乙醇可將DNA 鈉鹽沉淀出來.

也可用0.15 MNaCL液反復(fù)洗滌細(xì)胞破碎液除去RNP，再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白，再按氯仿---異醇法除去蛋白.

兩種方法比較，后種方法使核酸降解可能少一些.

以稀鹽酸溶液提取DNA 時，加入適量去污劑，如SDS可有助于蛋白質(zhì)與DNA 的分離.在提取過程中為抑制組織中的DNase對DNA 的降解作用，在氯化鈉溶液中加入檸檬酸鈉作為金屬離子的烙合劑.通常用.15MNaCL,0.015M檸檬鈉，并稱SSC溶液，提取DNA.

(2).陰離子去污劑法：

用SDS或二甲苯酸鈉等去污劑使蛋白質(zhì)變性，可以直接從生物材料中提取DNA .由于細(xì)胞中DNA與蛋白質(zhì)之間常借靜電引力或配位鍵結(jié)合，因為陰離子去污劑能夠破壞這種價鍵，所以常用陰離子去污劑提取DNA.

(3).苯酚抽提法：

苯酚作為蛋白變性劑，同時抑制了DNase的降解作用.用苯酚處理勻漿液時，由于蛋白與DNA 聯(lián)結(jié)鍵已斷，蛋白分子表面又含有很多極性基團(tuán)與苯酚相似相溶.蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相.離心分層后取出水層，多次重復(fù)操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性質(zhì)，用乙醇沉淀DNA .此時DNA是十分粘稠的物質(zhì)，可用玻璃漫漫繞成一團(tuán)，取出.此法的特點是使提取的DNA保持天然狀態(tài) .

( 4).水抽提法：

利用核酸溶解于水的性質(zhì)，將組織細(xì)胞破碎后，用低鹽溶液除去RNA，然后將沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中，離心后收集上清液.在上清中加入固體氯化鈉調(diào)節(jié)至2.6M.加入2倍體積95%乙醇，立即用攪拌法攪出.然后分別用66% 80%和95%乙醇以及丙銅洗滌，最后在空氣中干燥，既得DNA樣品.此法提取的DNA中蛋白質(zhì)含量較高，故一般不用.為除蛋白可將此法加以改良，在提取過程中加入SDS.