根據(jù)可培養(yǎng)細(xì)菌的數(shù)量分類在腸道菌群中,可以培養(yǎng)到的細(xì)菌有400余種,依據(jù)其數(shù)量多少可以分為主要(優(yōu)勢)菌群(predominant microflora)和次要菌群(sub—dominant microflora)。
①主要(優(yōu)勢)菌群:指腸道菌群中數(shù)量大或種群密集度大的細(xì)菌,一般在10~10cfu/g以上,包括類桿菌屬、優(yōu)桿菌屬、雙歧桿菌屬、瘤胃球菌屬和梭菌屬等專性厭氧菌,通常屬于原籍菌群。優(yōu)勢菌群是對宿主發(fā)揮生理功能的菌群,在很大程度上影響著整個菌群的功能,決定著菌群對宿主的生理病理意義。
②次要菌群:數(shù)量在10~10cfu/g以下,主要為需氧菌或兼性厭氧菌,如大腸桿菌和鏈球菌等,流動性大,有潛在致病性,大部分屬于外籍菌群或過路菌群。檢測方法:1、采樣及稀釋 (1)按無菌操作法將檢樣25g(或25mL)放于含有225mL無菌水的三角瓶中(瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠)或滅菌乳缽內(nèi),經(jīng)充分振搖或研磨做成1:10的均勻稀釋液。
固體檢樣最好用無菌均質(zhì)器,以8000~10000r/min的速度離心1min,做成1:10的稀釋液。(2)用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1Ml,注入含有9mL無菌水的試管內(nèi),振搖混勻,做成1:100的稀釋液,換用1支lmL滅菌吸管,按上述操作依次作l0倍系列稀釋液。
(3)根據(jù)食品的衛(wèi)生要求或?qū)z驗樣品污染情況的估計,選擇三個稀釋度,每個稀釋度接種3管。也可直接用樣品接種。
2、乳糖初發(fā)酵試驗 即通常所說的假定試驗。其目的在于檢查樣品中有無發(fā)酵乳糖產(chǎn)生氣體的細(xì)菌。
將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi),接種量在1mL以上者,用雙倍乳糖膽鹽發(fā)酵管。lmL及1mL以下者,用單倍乳糖膽鹽發(fā)酵管。
每一個稀釋度接種3管,置36±1℃溫箱內(nèi),培養(yǎng)24±2h,如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣,則可報告為大腸菌群陰性,如有產(chǎn)氣者,則按下列程序進(jìn)行。3、分離培養(yǎng) 將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別劃線接種于伊紅美藍(lán)瓊脂平板,置36±1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)18~24h,然后觀察菌落形態(tài)并作革蘭氏染色、鏡檢并作復(fù)發(fā)酵試驗。
4、乳糖復(fù)發(fā)酵試驗 即通常所說的證實試驗,其目的在于證明經(jīng)乳糖初發(fā)酵試驗呈陽性反應(yīng)的試管內(nèi)分離到的革蘭陰性無芽胞桿菌,確能發(fā)酵乳糖產(chǎn)生氣體。在上述選擇性EMB培養(yǎng)基上,挑取可疑的大腸菌群菌落1~2個進(jìn)行革蘭染色,同時接種乳糖發(fā)酵管,置36±l℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24±2小時,觀察產(chǎn)氣情況。
凡乳搪發(fā)酵管產(chǎn)氣,革蘭染色為陰性反應(yīng)的無芽胞桿菌,即報告為大腸菌群陽性;凡乳糖發(fā)酵管不產(chǎn)氣或革蘭染色為陽性,則報告為大腸菌群陰性。擴(kuò)展資料:有益菌菌群的生理功能:如果腸內(nèi)有益菌菌群占優(yōu),腸內(nèi)黏膜呈現(xiàn)粉紅色,表示腸內(nèi)環(huán)境相當(dāng)良好。
1、吸收水分,糞便較軟,較易排泄 在胃部分解消化的食物,經(jīng)由小腸吸收營養(yǎng)后,成為粘稠狀物體送至大腸。然后再經(jīng)過18小時將水分及礦物質(zhì)吸收,就變成容易排泄的糞便。
腸道內(nèi)環(huán)境良好時,糞便的軟硬適中,排便會較為順利。2、緩和的蠕動,能順利將糞便排出 藉由腸的蠕動,將糞便緩慢的推送至肛門。
如果蠕動過快或太慢,都將影響糞便的構(gòu)成,導(dǎo)致便秘或者腹瀉。而如果腸內(nèi)干凈,則蠕動的速度就相當(dāng)?shù)挠幸?guī)律,糞便可順利排出。
3、有助維他命的合成 比菲德氏菌等好菌能維護(hù)肌膚的健康,并具有合成有助熱量產(chǎn)生的維他命B1、B2及B6等,以及與止血、骨骼形成有關(guān)的維他命K等之功用。健康的腸道,好菌會不斷繁殖,維他命的合成也可順利進(jìn)行。
4、迅速排出有害物質(zhì) 健康的腸道并非完全沒有壞菌的存在,有害物質(zhì)多少會產(chǎn)生。當(dāng)然還包括,吃進(jìn)體內(nèi)的食品化學(xué)添加物或是無法成為營養(yǎng)成分的物質(zhì)。
只要腸內(nèi)環(huán)境良好,這些物質(zhì)在開始危害身體前就被排出體外。5、避免病原菌的侵害 比菲德氏菌等好菌可以刺激并提高身體的免疫機(jī)能,而且易引起食物中毒等病原菌因具怕酸特質(zhì),所以像是含有好菌的乳酸飲料或健康食品等,都可抑制病原菌在腸內(nèi)繁殖。
腸道有益菌菌群除了以上功能之外,對人體還有營養(yǎng)作用,如糖尿病、高血壓、高血脂等。B族維生素和非必需氨基酸對人類的毛發(fā)具有重要的作用,當(dāng)缺少這些營養(yǎng)元素,會導(dǎo)致頭發(fā)脫落或毛發(fā)發(fā)黃、發(fā)叉,容易折斷等現(xiàn)象。
參考資料來源:百度百科-腸道菌群。
一、大腸菌群介紹 大腸菌群并非細(xì)菌學(xué)分類命名,而是衛(wèi)生細(xì)菌領(lǐng)域的用語,它不代表某一個或某一屬細(xì)菌,而指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關(guān)的細(xì)菌,這些細(xì)菌在生化及血清學(xué)方面并非完全一致,其定義為:需氧及兼性厭氧、在37℃能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。
一般認(rèn)為該菌群細(xì)菌可包括大腸埃希氏菌、檸檬酸桿菌、產(chǎn)氣克雷白氏菌和陰溝腸桿菌等。 大腸菌群分布較廣,在溫血動物糞便和自然界廣泛存在。
調(diào)查研究表明,大腸菌群細(xì)菌多存在于溫血動物糞便、人類經(jīng)常活動的場所以及有糞便污染的地方,人、畜糞便對外界環(huán)境的污染是大腸菌群在自然界存在的主要原因。糞便中多以典型大腸桿菌為主,而外界環(huán)境中則以大腸菌群其他型別較多。
大腸菌群是作為糞便污染指標(biāo)菌提出來的,主要是以該菌群的檢出情況來表示食品中有否糞便污染。大腸菌群數(shù)的高低,表明了糞便污染的程度,也反映了對人體健康危害性的大小。
糞便是人類腸道排泄物,其中有健康人糞便,也有腸道患者或帶菌者的糞便,所以糞便內(nèi)除一般正常細(xì)菌外,同時也會有一些腸道致病菌存在(如沙門氏菌、志賀氏菌等),因而食品中有糞便污染,則可以推測該食品中存在著腸道致病菌污染的可能性,潛伏著食物中毒和流行病的威脅,必須看作對人體健康具有潛在的危險性。 大腸菌群是評價食品衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo)之一,目前已被國內(nèi)外廣泛應(yīng)用于食品衛(wèi)生工作中。
二、大腸菌群檢驗方法: 由于大腸菌群指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關(guān)的細(xì)菌,即:需氧及兼性厭氧、在37℃能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。因此大腸菌群的檢測一般都是按照它的定義進(jìn)行。
目前國內(nèi)采用的進(jìn)出口食品大腸菌群檢測方法主要有國家標(biāo)準(zhǔn)和原國家商檢局制訂的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。兩個標(biāo)準(zhǔn)方法在檢測程序上略有不同。
(一)國家標(biāo)準(zhǔn):國家標(biāo)準(zhǔn)采用三步法,即:乳糖發(fā)酵試驗、分離培養(yǎng)和證實試驗。 乳糖發(fā)酵試驗:樣品稀釋后,選擇三個稀釋度,每個稀釋度接種三管乳糖膽鹽發(fā)酵管。
36±1℃培養(yǎng)48±2h,觀察是否產(chǎn)氣。 分離培養(yǎng):將產(chǎn)氣發(fā)酵管培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種于伊紅美藍(lán)瓊脂平板上,36±1℃培養(yǎng)18-24h,觀察菌落形態(tài)。
證實試驗:挑取平板上的可疑菌落,進(jìn)行革蘭氏染色觀察。同時接種乳糖發(fā)酵管36±1℃培養(yǎng)24±2h,觀察產(chǎn)氣情況。
報告:根據(jù)證實為大腸桿菌陽性的管數(shù),查MPN表,報告每100ml(g)大腸菌群的MPN值。 具體操作參見GB4789.3-94 《中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn) 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗 大腸菌群測定》 (二)原國家商檢局制訂的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn),等效采用美國FDA的標(biāo)準(zhǔn)方法,用于對出口食品中的大腸桿菌進(jìn)行檢測。
本方法采用兩步法: 推測試驗:樣品稀釋后,選擇三個稀釋度,每個稀釋度接種三管LST肉湯。36±1℃培養(yǎng)48±2h,觀察是否產(chǎn)氣。
證實試驗:將產(chǎn)氣管培養(yǎng)物接種煌綠乳糖膽鹽(BGLB)肉湯管中,36±1℃培養(yǎng)48±2h,觀察是否產(chǎn)氣。以BGLB產(chǎn)氣為陽性。
查MPN表,報告每ml(g)樣品中大腸菌群的MPN值。 具體操作參見 SN0169-92 《中華人民共和國進(jìn)出口商品檢驗行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗方法》 三、說明: 1.MPN檢索表: MPN 為最大可能數(shù)(Most Probable Number)的簡稱。
這種方法,對樣品進(jìn)行連續(xù)系列進(jìn)行稀釋,加入培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),從規(guī)定的反應(yīng)呈陽性管數(shù)的出現(xiàn)率,用概率論來推算樣品中菌數(shù)最近似的數(shù)值。 MPN檢索表只給了三個稀釋度,如改用不同的稀釋度,則表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)降低或增加10倍。
注意國家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中所附MPN表所用稀釋度是不同的,而且結(jié)果報告單位也不相同。 2.初發(fā)酵和證實試驗: 無論是國家標(biāo)準(zhǔn)的三步法還是行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的兩步法,都利用了乳糖發(fā)酵管進(jìn)行了兩次發(fā)酵試驗,培養(yǎng)基的配制略有不同,但都是為了證實培養(yǎng)物是否符合大腸菌群的定義,即“在37℃分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣”。
初發(fā)酵陽性管,不能肯定就是大腸菌群細(xì)菌,經(jīng)過證實試驗后,有時可能成為陰性。有數(shù)據(jù)表明,食品中大腸菌群檢驗步驟的符合率,初發(fā)酵與證實試驗相差較大。
因此,在實際檢測工作中,證實試驗是必需的。 3.產(chǎn)氣量與倒管: 在乳糖發(fā)酵試驗工作中,經(jīng)常可以看到在發(fā)酵倒管內(nèi)極微少的氣泡(有時比小米粒還?。?,有時可以遇到在初發(fā)酵時產(chǎn)酸或沿管壁有緩緩上浮的小氣泡。
實驗表明,大腸菌群的產(chǎn)氣量,多者可以使發(fā)酵倒管全部充滿氣體,少者可以產(chǎn)生比小米粒還小的氣泡。如果對產(chǎn)酸但未產(chǎn)氣的乳糖發(fā)酵如有疑問時,可以用手輕輕打動試管,如有氣泡沿管壁上浮,即應(yīng)考慮可能有氣體產(chǎn)生,而應(yīng)作進(jìn)一步試驗。
4.挑選菌落: 國家標(biāo)準(zhǔn)中,需要對初發(fā)酵陽性培養(yǎng)物接種伊紅美藍(lán)平板分離,對典型和可疑菌落進(jìn)行觀察和證實試驗。由于大腸菌群是一群細(xì)菌的總稱,在平板大腸菌群菌落的色澤、形態(tài)等方面較大腸菌更為復(fù)雜和多樣,而且與大腸菌群的檢出率密切相關(guān)。
國家標(biāo)準(zhǔn)方法規(guī)定伊紅美藍(lán)平板為分離培養(yǎng)基,在該平板上,大腸菌群菌落呈黑紫色有光澤或無光澤時,檢出率最高;紅色、粉紅色菌落檢出率較低。 另外,挑取菌落數(shù)與大腸菌群的檢出率有密切關(guān)系,只挑取一個菌。
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