干熱滅菌法是指2113在干燥環(huán)境(如火焰或干熱空氣)進(jìn)行滅菌的技術(shù)。一般有火焰滅菌法和干熱空氣滅菌法。本法適用于干燥粉末、凡士林、油脂的滅菌,也適用于玻璃器皿(如試管、平皿、吸管、注射器)和金屬器5261具(如測定效價的鋼管、針頭、攝子、剪刀等)的滅菌4102。
濕熱滅菌法是指用飽和水蒸氣、沸水或流通蒸汽進(jìn)行滅菌的方法,由于蒸汽潛熱大,穿透力強(qiáng),容易使蛋白質(zhì)變性或凝固,所以該法的滅菌效率比干熱滅菌法高,是藥物制劑生產(chǎn)過程中最常1653用的滅菌方法。濕熱滅菌法回可分為:煮沸滅菌法、巴氏消毒法、高壓蒸汽滅菌法、流通蒸汽滅菌法、和間歇蒸汽滅菌法。藥品、藥品的溶液、玻璃器械、培養(yǎng)基、無菌衣、敷料以及其他遇高溫與濕熱不發(fā)生變化答或損壞的物質(zhì),均可用本法滅菌。
細(xì)菌的繁殖體在干燥狀態(tài)下,80℃~100℃ 1小時可被殺死;芽胞需要加熱至160℃~170℃ 2小時才殺滅。干熱滅菌的方法有①焚燒:用火焚燒是一種徹底的滅菌方法,破壞性大,僅適用于廢棄物品或動物尸體等;②燒灼:直接用火焰滅菌,適用于實驗室的金屬器械(鑷、剪、接種環(huán)等)、玻璃試管口和瓶口等的滅菌;③干烤:在干烤箱(hot air sterilizer)內(nèi)進(jìn)行,加熱至160℃~170℃維持2小時,可殺滅包括芽胞在內(nèi)的所有微生物。適用于耐高溫的玻璃器皿、瓷器、玻質(zhì)注射器等;④紅外線(infrared):是波長為770nm~1000μm的電磁波,以1μm~10μm波長的熱效應(yīng)最強(qiáng)。紅外線的熱效應(yīng)只能在照射到的表面產(chǎn)生,不能使物體均勻加熱,常用于碗、筷等食具的滅菌;⑤微波(microwave):波長為1mm~1000mm的電磁波統(tǒng)稱為微波,可穿透玻璃、塑料薄膜與陶瓷等物質(zhì),但不能穿透金屬表面。微波爐的熱效應(yīng)分布不均勻,滅菌效果不可靠,用于非金屬器械及食具消毒。
1.高壓蒸汽滅菌
為濕熱滅菌方法的一種。是微生物培養(yǎng)中最重要的滅菌方法。這種滅菌方法是基于水在煮沸時所形成的蒸汽不能擴(kuò)散到外面去,而聚集在密封的容器中,在密閉的情況下,隨著水的煮沸,蒸汽壓力升高,溫度也相應(yīng)增高。壓力和溫度之間的關(guān)系見表9-1。
高壓蒸汽是最有效的滅菌法,能迅速地達(dá)到完全徹底滅菌。一般在15磅/英寸2壓力下(121.6℃),15~30分鐘,所有微生物包括芽孢在內(nèi)都可殺死。它適用于對一般培養(yǎng)基和玻璃器皿的滅菌。
進(jìn)行高壓蒸汽滅菌的容器是高壓蒸汽滅菌鍋。高壓蒸汽滅菌鍋是一個能耐壓又可以密閉的金屬鍋,有立式與臥式兩種。
可以用電熱、煤氣、蒸汽等。鍋上裝有壓力表,有的還裝有溫度計,能及時了解鍋內(nèi)壓力及溫度。鍋上還設(shè)有排氣口,其作用是在密閉之前,利用蒸汽將鍋內(nèi)的冷空氣排凈,另外還裝有安全活門,如果壓力超過一定限度,活門即可自動打開,放出過多的蒸汽。
2.干熱滅菌
微生物培養(yǎng)中常用的干熱滅菌是指熱空氣滅菌。一般在電烘箱中進(jìn)行。干熱滅菌所需溫度較濕熱滅菌高,時間也較濕熱滅菌長。這是因為蛋白質(zhì)在干燥無水的情況下不容易凝固。一般須在160℃左右保持恒溫3~4小時,方能達(dá)到滅菌的目的。
干熱滅菌適用于空玻璃器皿的滅菌,凡帶有橡膠的物品和培養(yǎng)基,都不能進(jìn)行干熱滅菌。
3.間歇滅菌
各種微生物的營養(yǎng)體在100℃溫度下半小時即可被殺死。而其芽孢和孢子在這種條件下卻不會失去生活力。間歇滅菌就是根據(jù)這一原理進(jìn)行的。
間歇滅菌的方法是用100℃、30分鐘殺死培養(yǎng)基內(nèi)雜菌的營養(yǎng)體,然后將這種含有芽孢和孢子的培養(yǎng)基在溫箱內(nèi)或室溫下放置24小時,使芽孢和孢子萌發(fā)成為營養(yǎng)體。這時再以100℃處理半小時,再放置24小時。如此連續(xù)滅菌3次,即可達(dá)到完全滅菌的目的。
間歇滅菌通常在流動蒸汽的滅菌鍋中進(jìn)行,也可用普通鋁鍋代替。這種滅菌方法多用于明膠、牛乳等物質(zhì)的滅菌,這類物質(zhì)在100℃以上的溫度下處理較長時間,會被破壞,而用間歇滅菌法就既起到了殺菌作用,又使被處理的物質(zhì)免遭破壞。
4.紫外線滅菌
紫外線殺菌力最強(qiáng)的是波長2650~2660?的部分。無菌室緩沖間和接種箱常用紫外線燈作空氣滅菌。無菌室和緩沖間的照射時間為20~50分鐘(視房間大小而定),接種箱照射10~15分鐘即可。
為了加強(qiáng)紫外線滅菌的效果,在照射前,可在無菌室、緩沖間或接種箱內(nèi)噴灑5%石炭酸,以使空氣中附著有微生物的塵埃降落,同時也可以殺死一部分微生物。無菌室的工作臺的臺面和椅子,可用2~3%的來蘇兒擦洗。然后再照射紫外線。由于紫外線對人體有傷害作用,所以人不要直視正在照射的紫外線燈,也不要在照射情況下進(jìn)行工作。
滅菌后,為了檢驗紫外線的滅菌效果,可以在無菌室、緩沖間或接種箱內(nèi)放一套盛有培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿,將皿蓋打開5~10分鐘,蓋好后,放入溫箱中培養(yǎng)。如果只有一、二個菌落,可認(rèn)為滅菌效果良好。如雜菌叢生。則需延長照射時間或同時加強(qiáng)其它滅菌措施。
1.干熱滅菌法
1.1灼燒與火焰滅菌:灼燒主要是用于接種工具滅菌,在火焰上灼燒即可達(dá)到徹底滅菌,火焰滅菌通常用于無菌操作中,將試管口、玻璃瓶口、硅氟塑料塞等反復(fù)通過火焰數(shù)次,利用火焰對管口等進(jìn)行滅菌,阻止管口污染,作為無菌操作過程中的輔助滅菌手段。
1.2干烤滅菌:利用熱輻射及干熱空氣進(jìn)行滅菌。一般將待檢滅菌的物品如金屬、玻璃、笭閥蒂合酈骨墊攤??沾芍破钒b后,均可在烤箱內(nèi)干熱滅菌。通常加熱至160℃,保溫2h可完全滅菌。但不宜超過170℃,玻璃量具易變形。降溫過速,驟冷易引起玻璃器皿炸裂。干熱滅菌時裝入干烤箱內(nèi)的物品切勿緊密,應(yīng)有空隙,利于熱空氣流動,過密,致使溫度不均,部分物品滅菌不徹底。
2.濕熱滅菌法
通過加壓提高蒸汽溫度,用高壓蒸汽滅菌,穿透力強(qiáng),溫度高,滅菌效果最好。
注意事項:1.完全排除高壓滅菌器內(nèi)的冷空氣。有冷空氣存在時,在同一表壓下所達(dá)到的溫度值要低,而冷空氣排出越少,溫度就低得越多。在高壓蒸汽滅菌時,為保證達(dá)到規(guī)定的溫度,必須將冷空氣完全排除。否則,雖然壓力達(dá)到,而溫度達(dá)不到規(guī)定的要求,滅菌就不徹底。
3.紫外線 殺菌譜廣,但穿透力弱,影響因素多,殺菌效能受到一定限制。
紫外線消毒效果與紫外線強(qiáng)度、照射時間、溫度與濕度等因素有關(guān)。
我國規(guī)定紫外燈照射強(qiáng)度距離1m處不低于70μw/cm2。一般紫外燈使用超過100h,則應(yīng)更換。表面有塵土,降低滅菌效果。紫外燈殺菌的溫度以20~40℃,相對濕度40%~60%為宜。
干熱滅菌法是指在干燥環(huán)境(如火焰或干熱空氣)進(jìn)行滅菌的技術(shù)。
一般有火焰滅菌法和干熱空氣滅菌法。1。
火焰滅菌法是指用火焰直接燒灼的滅菌方法。該方法滅菌迅速、可靠、簡便,適合于耐火焰材料(如金屬、玻璃及瓷器等)物品與用具的滅菌,不適合藥品的滅菌。
2。干熱空氣滅菌法是指用高溫干熱空氣滅菌的方法。
該法適用于耐高溫的玻璃和金屬制品以及不允許濕熱氣體穿透的油脂(如油性軟膏機(jī)制、注射用油等)和耐高溫的粉末化學(xué)藥品的滅菌,不適合橡膠、塑料及大部分藥品的滅菌。在干熱狀態(tài)下,由于熱穿透力較差,微生物的耐熱性較強(qiáng),必須長時間受高溫的作用才能達(dá)到滅菌的目的。
因此。干熱空氣滅菌法采用的溫度一般比濕熱滅菌法高。
為了保證滅菌效果,一般規(guī)定:135-140攝氏度滅菌3-5h;160-170攝氏度滅菌2-4h;180-200攝氏度滅菌0。5-1h。
干熱滅菌法細(xì)菌的繁殖體在干燥狀態(tài)下,80℃~100℃1小時可被殺死;芽胞需要加熱至160℃~170℃2小時才殺滅。 干熱滅菌的方法有①焚燒:用火焚燒是一種徹底的滅菌方法,破壞性大,僅適用于廢棄物品或動物尸體等;②燒灼:直接用火焰滅菌,適用于實驗室的金屬器械(鑷、剪、接種環(huán)等)、玻璃試管口和瓶口等的滅菌;③干烤:在干烤箱(hotairsterilizer)內(nèi)進(jìn)行,加熱至160℃~170℃維持2小時,可殺滅包括芽胞在內(nèi)的所有微生物。
適用于耐高溫的玻璃器皿、瓷器、玻質(zhì)注射器等;④紅外線(infrared):是波長為770nm~1000μm的電磁波,以1μm~10μm波長的熱效應(yīng)最強(qiáng)。紅外線的熱效應(yīng)只能在照射到的表面產(chǎn)生,不能使物體均勻加熱,常用于碗、筷等食具的滅菌;⑤微波(microwave):波長為1mm~1000mm的電磁波統(tǒng)稱為微波,可穿透玻璃、塑料薄膜與陶瓷等物質(zhì),但不能穿透金屬表面。
微波爐的熱效應(yīng)分布不均勻,滅菌效果不可靠,用于非金屬器械及食具消毒。
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