1。
低離子強度鹽水試驗:可提高抗D抗體與D陽性紅細(xì)胞結(jié)合率,并提高其靈敏度。 2。
酶介質(zhì)法:木瓜酶或菠蘿酶可以破壞紅細(xì)胞表面的唾液酸,使紅細(xì)胞膜失去電荷,縮小紅細(xì)胞間的距離;同時酶還可以部分地改變紅細(xì)胞表面結(jié)構(gòu),使某些隱蔽的抗原得以暴露,增強凝集性;且對IgG的作用大于IgM,故有利于檢出不完全抗體。 (1)試劑:IgG型抗D標(biāo)準(zhǔn)血清、1%木瓜酶(或菠蘿蛋白酶)溶液、5%D陽性紅細(xì)胞生理鹽水懸液、5%D陰性紅細(xì)胞生理鹽水懸液。
(2)注意事項:①Rh血型系統(tǒng)的抗體多由獲得性免疫產(chǎn)生,血清中很少有天然抗體,故不需要做反定型。 ②對照:酶易失活,故每次試驗都要設(shè)置陽性對照。
若陽性對照不出現(xiàn)凝集,表明酶或抗血清已經(jīng)失效。酶活性過強出現(xiàn)假陽性結(jié)果,因而要設(shè)立陰性對照,以排除假陽性。
只有在陽性對照管出現(xiàn)凝集而陰性對照管不凝集的情況下,才說明被檢管的結(jié)果是可靠的。③結(jié)果陰性:說明被檢紅細(xì)胞上無相應(yīng)抗原,但由于DU抗原性弱,因此,如被檢者無凝集,還應(yīng)進一步檢查以排除DU的可能。
你這個肯定自己弄不了啊,得去醫(yī)院讓檢驗科的來?。?/p>
鑒定方法 (1)生理鹽水凝集法:①玻片法:操作簡單,適于大量標(biāo)本檢查,但反應(yīng)時間長;被檢查者如血清抗體效價低,則不易引起紅細(xì)胞凝集,因此,不適于反向定型。②試管法:由于離心作用可加速凝集反應(yīng),故反應(yīng)時間短,而且,借助于離心力可以使紅細(xì)胞接觸緊密,促進凝集作用,適于急診檢查。(2)凝膠微柱法:是紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體在凝膠微柱介質(zhì)中發(fā)生凝集反應(yīng)的免疫學(xué)方法。血型抗體為單克隆抗體,加入試劑、標(biāo)本,用專用離心機離心后可直接用肉眼觀察結(jié)果或用血型儀分析。此法操作標(biāo)準(zhǔn)化,定量加樣,確保結(jié)果準(zhǔn)確性。
Rh血型鑒定一般指Rh系統(tǒng)中D抗原的檢測,根據(jù)病人紅細(xì)胞是否帶有D抗原,分為Rh陽性和Rh陰性。
蛋白水解酶法 (包括菠蘿酶、木瓜酶、無花果酶、胰蛋白酶等) 以菠蘿酶介質(zhì)法為例:
⑴取菠蘿酶1g,加pH5.5磷酸鹽緩沖液100ml,充分振搖混勻,置37℃水浴箱30
血型的遺傳規(guī)律
min,離心沉淀后取上清液即1%菠蘿酶液。放置4℃冰箱貯存。
⑵待檢者紅細(xì)胞及對照紅細(xì)胞用生理鹽水洗滌1次(有溶血的紅細(xì)胞除外),配成5%紅細(xì)胞懸液。
⑶取小試管15支,分3排,每排試管按C、c、D、E、e順序標(biāo)記。
⑷每排第1管加抗C血清,第2管加抗c血清,第3管加抗D血清,第4管加抗E血清,第5管加抗e血清各1滴。
⑸第1排各管加待檢者紅細(xì)胞懸液各1滴,第2排加陽性對照紅細(xì)胞,第3排加陰性對照紅細(xì)胞。
⑹每排各管加1%菠蘿酶液1滴。
鹽水介質(zhì)法 ⑴試管法①取小試管3支,1支注明抗D,另1支注明陽性對照,最后1支注明陰性對照;②將室溫鹽水反應(yīng)活性的抗D血清各1滴加入上述試管內(nèi);③抗D試管中加入1滴5%待檢者紅細(xì)胞(鹽水、血清)
血型匹配
懸液,陽性對照及陰性對照試管中分別加入相應(yīng)的陽性紅細(xì)胞及陰性紅細(xì)胞懸液1滴;④輕輕混勻,于3000r/min離心15s;⑤取出輕輕擺動觀察有無凝集。
⑺混勻,置入37℃水浴箱中1h觀察結(jié)果,若無凝集,應(yīng)查找原因。
1.AB0血型鑒定原理
常用鹽水凝集法檢測紅細(xì)胞上存在的血型抗原,以及血清中存在的血型抗體,依據(jù)抗原抗體存在的情況判定血型。常規(guī)的方法有:①正向定型:用已知抗體的標(biāo)準(zhǔn)血清檢查紅細(xì)胞上未知的抗原。②反向定型:用已知血型的標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞檢查血清中未知的抗體。結(jié)果判定:凡紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集者為陽性,呈散在游離狀態(tài)為陰性。ABO血型定型原則見表1-5-2。
2.鑒定方法
(1)生理鹽水凝集法:①玻片法:操作簡單,適于大量標(biāo)本檢查,但反應(yīng)時間長;被檢查者如血清抗體效價低,則不易引起紅細(xì)胞凝集,因此,不適于反向定型。②試管法:由于離心作用可加速凝集反應(yīng),故反應(yīng)時間短,而且,借助于離心力可以使紅細(xì)胞接觸緊密,促進凝集作用,適于急診檢查。
紅細(xì)胞亞型抗原性弱,如抗A抗B標(biāo)準(zhǔn)血清效價低時,易造成漏檢或誤定。如加用O型(抗A、B)血清和反向定型,可避免此類錯誤。
玻片法凝集結(jié)果判斷:紅細(xì)胞呈均勻分布,無凝集顆粒,鏡下紅細(xì)胞分散。在低倍鏡下凝集程度強弱判斷標(biāo)準(zhǔn):①呈一片或幾片凝塊,僅有少數(shù)單個游離紅細(xì)胞為(++++)。②呈數(shù)個大顆粒狀凝塊,有少數(shù)單個游離紅細(xì)胞為(+++)。③數(shù)個小凝集顆粒和一部分微細(xì)凝集顆粒,游離紅細(xì)胞約占1/2為(++)。④肉眼可見無數(shù)細(xì)沙狀小凝集顆粒。于鏡下觀察,每凝集團中有5~8個以上紅細(xì)胞凝集為(+)。⑤可見數(shù)個紅細(xì)胞凝集在一起,周圍有很多的游離紅細(xì)胞(±)。⑥可見極少數(shù)紅細(xì)胞凝集,而大多數(shù)紅細(xì)胞仍呈分散分布為混合凝集外觀。⑦鏡下未見細(xì)胞凝集,紅細(xì)胞均勻分布為(-)。
(2)凝膠微柱法:是紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體在凝膠微柱介質(zhì)中發(fā)生凝集反應(yīng)的免疫學(xué)方法。血型抗體為單克隆抗體,加入試劑、標(biāo)本,用專用離心機離心后可直接用肉眼觀察結(jié)果或用血型儀分析。此法操作標(biāo)準(zhǔn)化,定量加樣,確保結(jié)果準(zhǔn)確性。
3.抗A、抗B和抗AB標(biāo)準(zhǔn)血清標(biāo)準(zhǔn)
準(zhǔn)血清均采自健康人,并應(yīng)符合下述條件:①特異性:只能與相應(yīng)的紅細(xì)胞抗原發(fā)生凝集,無非特異性凝集。②效價:我國標(biāo)準(zhǔn)抗A和抗B血清效價均在1:128以上。③親和力:我國標(biāo)準(zhǔn)要求抗A對A1、A2及A2B發(fā)生反應(yīng)開始出現(xiàn)凝集的時間分別是15s、30s和45s;抗B對B型紅細(xì)胞開始出現(xiàn)凝集的時間為15s。凝集強度為3min時,凝塊不小于1mm2。④冷凝集素效價:在1:4以下。⑤無菌。⑥滅活補體。
你這個肯定自己弄不了啊,得去醫(yī)院讓檢驗科的來??!鑒定方法 (1)生理鹽水凝集法:①玻片法:操作簡單,適于大量標(biāo)本檢查,但反應(yīng)時間長;被檢查者如血清抗體效價低,則不易引起紅細(xì)胞凝集,因此,不適于反向定型。
②試管法:由于離心作用可加速凝集反應(yīng),故反應(yīng)時間短,而且,借助于離心力可以使紅細(xì)胞接觸緊密,促進凝集作用,適于急診檢查。(2)凝膠微柱法:是紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體在凝膠微柱介質(zhì)中發(fā)生凝集反應(yīng)的免疫學(xué)方法。
血型抗體為單克隆抗體,加入試劑、標(biāo)本,用專用離心機離心后可直接用肉眼觀察結(jié)果或用血型儀分析。此法操作標(biāo)準(zhǔn)化,定量加樣,確保結(jié)果準(zhǔn)確性。
Rh血型鑒定一般指Rh系統(tǒng)中D抗原的檢測,根據(jù)病人紅細(xì)胞是否帶有D抗原,分為Rh陽性和Rh陰性。蛋白水解酶法 (包括菠蘿酶、木瓜酶、無花果酶、胰蛋白酶等) 以菠蘿酶介質(zhì)法為例:⑴取菠蘿酶1g,加pH5.5磷酸鹽緩沖液100ml,充分振搖混勻,置37℃水浴箱30 血型的遺傳規(guī)律min,離心沉淀后取上清液即1%菠蘿酶液。
放置4℃冰箱貯存。⑵待檢者紅細(xì)胞及對照紅細(xì)胞用生理鹽水洗滌1次(有溶血的紅細(xì)胞除外),配成5%紅細(xì)胞懸液。
⑶取小試管15支,分3排,每排試管按C、c、D、E、e順序標(biāo)記。⑷每排第1管加抗C血清,第2管加抗c血清,第3管加抗D血清,第4管加抗E血清,第5管加抗e血清各1滴。
⑸第1排各管加待檢者紅細(xì)胞懸液各1滴,第2排加陽性對照紅細(xì)胞,第3排加陰性對照紅細(xì)胞。⑹每排各管加1%菠蘿酶液1滴。
鹽水介質(zhì)法 ⑴試管法①取小試管3支,1支注明抗D,另1支注明陽性對照,最后1支注明陰性對照;②將室溫鹽水反應(yīng)活性的抗D血清各1滴加入上述試管內(nèi);③抗D試管中加入1滴5%待檢者紅細(xì)胞(鹽水、血清) 血型匹配懸液,陽性對照及陰性對照試管中分別加入相應(yīng)的陽性紅細(xì)胞及陰性紅細(xì)胞懸液1滴;④輕輕混勻,于3000r/min離心15s;⑤取出輕輕擺動觀察有無凝集。⑺混勻,置入37℃水浴箱中1h觀察結(jié)果,若無凝集,應(yīng)查找原因。
一、什么是Rh血型?
人類紅細(xì)胞血型由多達二十多種的血型系統(tǒng)組成,ABO和Rh血型是與人類輸血關(guān)系最為密切的兩個血型系統(tǒng)。當(dāng)一個人的紅細(xì)胞上存在一種D血型物質(zhì)(抗原)時,則稱為Rh陽性,用Rh(+)表示;當(dāng)缺乏D抗原時即為Rh陰性,用RH(-)表示。
二、Rh(-)屬稀有血型嗎?
Rh(-)的分布因種族不同而差異很大,在白種人中的比例較高,約百分之十五。中國人群中,新疆維吾爾等少數(shù)民族Rh(-)的分布為百分五;蒙古族人接近百分之一;漢族人所占的比例極少,僅千分之三,屬稀有血型。如果同時考慮ABO和Rh血型系統(tǒng),在漢族人群中尋找AB型Rh(-)同型人的機會不到萬分之三,十分罕見。
三、Rh血型是如何遺傳的?
Rh(-)基因是隱性基因。當(dāng)Rh(+)的父母帶有RH(-)基因,且同時遺傳給子代時,其孩子即表現(xiàn)為Rh(-),雙親有一人是Rh(-)時,其子女為Rh(-)的機會增大,反之機會減少。
四、Rh(-)有何意義?
無論是Rh(-)者還是Rh(+)者其差別僅僅是血型的不同,都屬健康人群。但Rh(-)者遇到特殊時其臨床意義不容忽視,如連續(xù)兩胎母嬰Rh血型不合的妊娠,很可能導(dǎo)致胎兒的嚴(yán)重傷害;又如有輸血、人流等免疫史的病人再次輸入Rh(+)血時,可能產(chǎn)生強烈的溶血性輸血反應(yīng)。
五、Rh(-)者如何自我保護?
請您記住這條原則:血液只能同型輸注,即A型Rh(-)患者只能輸A型Rh(-)血,B型的只能輸B型Rh(-)血,假如您生病或手術(shù)需要輸血時,您一定要將您是Rh(-)血型的情況告知醫(yī)生,以便醫(yī)生及早和市血液中心聯(lián)系,組織您所需要的Rh(-)血源。假如您是未育女性,請您做好計劃生育以避免人工流產(chǎn),若您已有流產(chǎn)或輸血史,妊娠期務(wù)必到血站血型室進行新生兒溶血病的預(yù)測檢查,以防止今后新生兒溶血病的發(fā)生。
緊急情況時能否及時向Rh(-)患者供應(yīng)同型血液是一件性命悠關(guān)的大事,血液中心的血型工作者以保障每一位Rh(-)患者的輸血安全為己任,常年不懈地對數(shù)以萬計的供血人群進行Rh(-)血型篩選,一旦篩選到Rh(-)血,這袋血就立即做上特殊的標(biāo)記并保存在4℃冰箱中以備急需。
七、Rh(-)者輸血供應(yīng)有保障嗎?
盡管輸血工作者防患于未然已竭盡全力,但緊急情況時Rh(-)者可能缺乏同型而危及生命的潛在危險依然存在。其實,消除這一困擾的方法很簡單:即所有Rh(-)者同舟共濟,在隨時作為可能的受血者的同時,也隨時作為一名高尚的供血者,這樣您和所有的Rh(-)者的生命都將得保障。
血型與輸血原則
一、血型與紅細(xì)胞凝集
若將血型不相容的兩個人的血滴放在玻片上混合,其中的紅細(xì)胞即聚集成簇,這種相容稱為凝集(agglutination)。紅細(xì)胞的凝集有時還伴有溶血。當(dāng)血型(bolld group)不相容的血液輸入循環(huán)血液中時,在血管內(nèi)可發(fā)生同樣的情況,此凝集成簇的紅細(xì)胞可以堵塞毛細(xì)血管,溶血將損害腎小管,同時常伴發(fā)過敏反應(yīng),其結(jié)果可危及生命。
造成紅細(xì)胞凝集的機制是抗原-抗體反應(yīng)。凝集原的特異性完全取決于鑲嵌入紅細(xì)胞膜上的一些特異糖蛋白,在凝集反應(yīng)中糖蛋白起著抗原的作用,因而稱它們?yōu)槟╝gglutinogen)。能與紅細(xì)胞膜上的凝集原起反應(yīng)的特異抗體則稱為凝集素(agglutinin)。凝集素是由γ-球蛋白構(gòu)成的,它們?nèi)芙庠谘獫{中。發(fā)生抗原-抗體反應(yīng)時,由于每個抗體上具有10個左右與抗原結(jié)合的部位,抗體在若干個帶有相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞之間形成橋梁,因而使它們聚集成簇。
人血液中,在紅細(xì)胞上都具有一套特異的凝集原。目前在紅細(xì)胞上已確定有許多種不同的抗原,大約有30種抗原能引發(fā)相當(dāng)劇烈的機體反應(yīng)。血型是指紅細(xì)胞上特異抗原的類型。表3-5中列出了ABO、Rh、MNSs、P等9個最重要的血型系統(tǒng)和它們所具有的特異抗體。動用現(xiàn)代免疫學(xué)手段可以在紅細(xì)胞膜上鑒別出約400種不同特征的抗原。如果只將其中已經(jīng)分類的抗原型作為依據(jù),就有3億種不同的可能組合,可見血型抗原最為重要的血型是ABO系統(tǒng)和Rh系統(tǒng)。
RhD抗原分布Rh血型鑒定一般指Rh系統(tǒng)中D抗原的檢測根據(jù)病人紅細(xì)胞是否帶有D抗原分為Rh陽性和Rh陰性。
鑒定方法Rh血型系統(tǒng)有5種抗血清,可以檢出18種不同的型別,但由于臨床實驗室很難得到這5種抗血清,況且在Rh 抗原中,抗原性最強,出現(xiàn)頻率最高,臨床上影響最大的是D抗原,所以臨床上一般只作D抗原的鑒定,受檢者紅細(xì)胞能與抗D血清凝集者為Rh陽性,不凝集者為陰性。 Rh血型的鑒定方法依抗體的性質(zhì)而定,完全抗體可用鹽水凝集試驗,不完全抗體可選用膠體介質(zhì)、木瓜酶及抗人球蛋白等試驗。
原理 Rh血型抗體多系不完全抗體,屬IgG型。因分子短小,與紅細(xì)胞上的抗原作用后,不能使紅細(xì)胞靠攏凝集。
木瓜酶能破壞紅細(xì)胞表面上的唾液酸,降低其表面電荷,減少紅細(xì)胞之間的排斥力,紅細(xì)胞得以靠攏,在不完全抗體的作用下,紅細(xì)胞便出現(xiàn)凝集。 試劑與材料 1.Rh抗血清常用的為不完全抗D、抗C、抗E及抗D。
2.5%受檢者紅細(xì)胞鹽水懸液 3.1%菠蘿酶(或木瓜酶)溶液稱取菠蘿酶1.0g,溶解于100mlpH5.5磷酸鹽緩沖液內(nèi)。 4.0.067mol/L磷酸鹽緩沖液(pH5。
5)Na2HPO45ml和KH2PO4 5ml混合而成。 5.已知Rh陽性及Rh陰性5%紅細(xì)胞懸液各1份。
操作1.取試管3支,分別標(biāo)明受檢者及陽、陰性對照。 2.每管各加抗血清1滴。
3.按標(biāo)記各管分別加不同的紅細(xì)胞懸液1滴及1%菠蘿酶試劑各1滴,混勻后置37℃水浴中1小時,觀察結(jié)果。結(jié)果判定陽性對照管凝集,陰性對照管無凝集,被檢管凝集為Rh(D)陽性,無凝集為Rh(D)陰性。
注意事項 1.應(yīng)嚴(yán)格控制溫度和時間,因Rh抗體凝集塊比較脆弱,觀察結(jié)果時,應(yīng)輕輕側(cè)動試管,不可用力振搖。 2.陽性對照取三人0型紅細(xì)胞混合而成,陰性對照不易得到。
一般設(shè)計方法為正常AB型血清1滴,加5%D陽性紅細(xì)胞懸液1;滴和菠蘿酶試劑1;滴混勻,與受檢管一同置37℃水浴18小時。 Rh血型鑒定正常值Rh+,稱作“Rh陽性”、“Rh顯性”,表示人類紅細(xì)胞有“Rh因子”; Rh-,稱作“Rh陰性”,“Rh隱性”,表示人類紅細(xì)胞沒有“Rh因子”。
Rh血型鑒定意義 1)中國漢族人的Rh陰性率為0。34%,絕大多數(shù)人為Rh陽性。
故由Rh血型不合引起的輸血反應(yīng),相對較ABO血型少; 2)Rh血型系統(tǒng)一般不存在天然抗體故第一次輸血時不會發(fā)現(xiàn)Rh血型不合但Rh陰性的受血者接受了Rh陽性血液后可產(chǎn)生免疫性抗Rh抗體如再次輸受Rh陽性血液時即可發(fā)生溶血性輸血反應(yīng) 3)Rh陰性母親孕育胎兒為Rh陽性胎兒的紅細(xì)胞經(jīng)胎盤進入母體刺激母體產(chǎn)生抗Rh抗體再經(jīng)胎盤進入胎兒體內(nèi)由于第一胎產(chǎn)生的抗Rh抗體很少極少發(fā)生新生兒溶血病第二次懷孕Rh陽性胎兒所產(chǎn)生抗Rh抗體增多可致新生兒溶血病若Rh陰性孕婦曾輸過Rh陽性血液史或第一胎因Rh血型不合流產(chǎn)史即令第一胎也可發(fā)生胎兒溶血病。
我們常用的血型系統(tǒng)是ABO血型。
人類還有一些其他血型系統(tǒng)(分類方法不一樣而已),Rh血型就是人類常見的血型系統(tǒng)之一。
Rh血型不合與ABO血型不合一樣,同樣可以導(dǎo)致輸血后的溶血反應(yīng)。
在Rh陰性患者輸入了Rh陽性血液以后才會產(chǎn)生抗Rh抗體(所以如果某個人RH陰性的話,第一次輸入RH陽性血一般不會出事)。
如果該患者再次輸入Rh陽性血液,便須做Rh血型鑒定,以避免可能出現(xiàn)的因Rh血型不合引起的溶血反應(yīng),盡管其概率很低。
(驗血時,檢查Rh血型主要是為了避免上述的溶血反應(yīng)。絕大多數(shù)的漢族人是Rh陰性的,但還是有例外。)
(Rh的檢查對孕產(chǎn)婦來說挺重要)對已知的Rh陰性患者則一定要輸Rh陰性血液。Rh陰性的孕婦,孕育的胎兒為Rh陽性時,如輸入Rh陽性血液,也會發(fā)生溶血反應(yīng)。母親與胎兒Rh血型不符還可能引起新生兒溶血癥。因此當(dāng)懷疑是由于Rh血型不合造成的新生兒溶血時,應(yīng)檢查母親及新生兒的Rh血型。
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