分子生物學實驗(請問分子生物學實驗室一般有哪些注意事項?)
1.請問分子生物學實驗室一般有哪些注意事項?
分子生物學操作中會涉及一系列儀器，使用不當導致實驗失敗、減少儀器使用壽命或損壞儀器。
因此在進行操作前細致地了解各種儀器的使用方法及注意事項，是使后繼實驗事半功倍的一個必要準備。冷凍離心機 低溫分離技術是分子生物學研究中必不可少的手段。
基因片段的分離、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物樣品的分離制備實驗中，都離不開低溫離心技術，因此低溫冷凍離心機已成為分子生物學研究中必需的重要工具。使用方法：1.離心機應放置在水平堅固的地板或平臺上，并力求使機器處于水平位置以免離心時造成機器震動。
2.打開電源開關，按要求裝上所需的轉頭，將預先以托盤天平平衡好的樣品放置于轉頭樣品架上（離心筒須與樣品同時平衡），關閉機蓋。3.按功能選擇鍵，設置各項要求：溫度、速度、時間、加速度及減速度，帶電腦控制的機器還需按儲存鍵，以便記憶輸入的各項信息。
4.按啟動鍵，離心機將執(zhí)行上述參數(shù)進行運作，到預定時間自動關機。5.待離心機完全停止轉動后打開機蓋，取出離心樣品，用柔軟干凈的布擦凈轉頭和機腔內壁，待離心機腔內溫度與室溫平衡后方可蓋上機蓋。
注意事項：1.機體應始終處于水平位置，外接電源系統(tǒng)的電壓要匹配，并要求有良好的接地線。2.開機前應檢查轉頭安裝是否牢固，機腔有無異物掉入。
3.樣品應預先平衡，使用離心筒離心時離心筒與樣品應同時平衡。4.揮發(fā)性或腐蝕性液體離心時，應使用帶蓋的離心管，并確保液體不外漏，以免腐蝕機腔或造成事故。
5.擦拭離心機腔時動作要輕，以免損壞機腔內溫度感應器。6.每次操作完畢應作好使用情況記錄，并定期對機器各項性能進行檢修。
7.離心過程中若發(fā)現(xiàn)異?，F(xiàn)象，應立即關閉電源，報請有關技術人員檢修。附：相對離心力與每分鐘轉速的換算 離心機的轉速，在以前實驗資料中一般以每分鐘多少轉來表示。
由于離心力不僅為轉速函數(shù)，亦為離心半徑的函數(shù)，即轉速相同時，離心半徑越長，產(chǎn)生的離心力越大。因此僅以轉速表達離心力是不夠科學的，近年來主張用相對離心力（RCF）來表示比較合理。
現(xiàn)在國際資料中，已改用相對離心力來表示。兩者的互換公式如下：PCR擴增儀：目前各公司提供的PCR儀操作方法各有不同，按其操作說明進行操作。
值得提出的是，在使用一定時期后，樣品孔的實際溫度與儀器顯示溫度有時會有較大差異，應當請廠商的技術支持人員校對儀器的各項性能。數(shù)字式酸度計：一、準備工作1.儀器應平放在符合使用環(huán)境的工作臺上，依視覺角度支起支架。
3.pH值的定位測量法：（一）二點定位法（高精度測量方法）（1） 連接好電極線路，將參比電極及活化滿24h以上清潔的PH電極移入第一標準緩沖液pH1中（例pH1=4.00），待儀器響應穩(wěn)定后，調節(jié)定位旋鈕至儀器顯示為“0.00”;(2) 將電級系統(tǒng)從第1種標準液中取出，用去離子水沖洗干凈后以濾紙吸干電級表面水份，移入第2種標準液（例pH2=9.18）中，儀器響應穩(wěn)定后，調節(jié)斜率旋鈕，使儀器顯示為（△pH=pH1-pH2=9.18-4.00=5.18）此后斜率旋鈕不可再動，除非更換電極系統(tǒng)；（3） 斜率調節(jié)完成后，重新調節(jié)定位旋鈕，使儀器顯示第2種標準液的實際pH值（9.18），至此2點定位結束；（4） 將電極從第2種標準液中取出沖洗、吸干后移入待測溶液中，儀器響應穩(wěn)定后顯示的數(shù)值即為待測溶液的pH值。（二）一點定位法（粗略測量法）（1） 將溫度補償旋鈕調至溶液溫度值；（2） 向左將斜率補償旋鈕旋轉至頭；（3） 將電級系統(tǒng)移入標準液中（一點法僅用一種標準液，如pH=4.00時），調節(jié)定位旋鈕使儀器顯示“4.00”;(4) 取出電級沖洗吸干水分后移至待測溶液中，儀器響應穩(wěn)定后顯示的數(shù)值即為待測溶液的pH值。
三、溫度的測量1.將功能選擇撥至溫度檔。2.將溫度探頭插入插孔，并將溫度探頭置于環(huán)境條件或溶液中，儀器響應穩(wěn)定后儀器顯示值即為環(huán)境條件或溶液溫度值。
四、注意事項1.認真做好儀器使用前準備工作。2.儀器通電后或測量過程中出現(xiàn)顯示不穩(wěn)或亂跳現(xiàn)象，應切斷電源進行檢查，如電壓、預熱時間及電極系統(tǒng)等是否正常。
3.使用不同電極應注意排除離子的干擾，選擇好鹽橋，必要時應使用離子強度固定劑。4.電極系統(tǒng)從第1種溶液取出移入第2種溶液之前，須用去離子水或雙蒸水清洗干凈，再用濾紙吸干表面水分，以免影響測定結果的準確性。
5. 儀器應存放于干燥、清潔無腐蝕的場所，每次測量結束后應關閉電源，退出電極及溫度探頭妥善保存。玻璃電極清洗后可浸于去離子水待用（注意水面不得低于玻璃球泡），甘汞電極清潔后套上橡皮帽置于配套盒中保存，當甘汞電極內充液泄漏或不飽和及鹽橋中斷時，應及時補充飽和內充液。
6.該類儀器均采用大規(guī)模集成電路，輸入阻值較高，在對儀器內部進行任何零部件修理焊接時，應使用45W以下有良好地線的烙鐵，無接地線烙鐵應撥下電源插頭焊接。分光光度計 不同物質對不同波長入射光的吸收程度各不相同，從而形成特征性的吸收光譜。
分光光度法不僅適應于可見光區(qū)，同時還可擴展至紫外光區(qū)及紅外光區(qū)，因此給科研實驗帶來了極大方便。下面重點介紹分光光度計的使用及注意事項。
使用規(guī)。
2.分子生物學實驗室一般有哪些注意事項
目前，分子生物學飛速發(fā)展，分子生物學相關的理論和技術已深入到生命科學的各個領域，一些常用的技術，如基因組DNA的分離純化，質粒DNA的抽提及純化，RNA的提取，PCR擴增，Southern blot等成為分子生物學研究的強有力工具，為分子生物學的發(fā)展起了巨大的推動作用，然后，這些實驗操作技術都涉及到氯仿、DEPC、同位素等有毒有害或具放射性的物質，對環(huán)境和人身安全也造成巨大的威脅。因此，弄清這些有害有毒物質的作用，加強實驗室安全管理，建立良好的制度和處理，保證分子生物學實驗室成為真正的科研陣地。
放射性物質的處理：放射性同位素技術具有靈敏、簡便和廉價等優(yōu)點，在分子生物學實驗室應用普遍，但由于放射性同位素的輻射會給人體造成損傷，如果使用不當或操作不規(guī)范，會造成環(huán)境污染，甚至損傷人員。在進行同位素操作時一定要注意個人防護，包括使用隔離、專用衣帽手套及防護背心、擋板等。對放射性同位素的污染進行安全性教育，實行責任到人的做法，對放射性物質統(tǒng)一保管、集中存放、集中處理的做法。在定購同位素時，根據(jù)需要量進行訂購。α-31p半衰期為14.5天，在southern blotting應用較廣，是危害較大的放射性物質。DNA雜交時，在探針標記、洗膜等幾個階段都涉及同位素。對含α-31p固體廢物，放入鐵皮箱10個半衰期（約半年）后埋到指定的地點：對于含α-31p濃度較高的液體廢物（如首次洗膜液），在厚實的朔料桶放置8個半衰期后倒入專用的下水道；含α-31p濃度較低的液體廢物（如二、三次洗膜液），則直接倒入專用的下水道。
4.3常見的有毒物質的處理：溴化乙錠、Trizol、丙烯酰氨、DEPC、甲酰氨等毒性高、環(huán)境危害大的物質，分類收集后統(tǒng)一處理。
4.3.1 EB(Ethidiunl bromide，溴化乙錠)：EB是一種強烈誘變劑并有中度毒性，應戴手套操作，對于含有EB的溶液也不應直接倒下水道，用后妥善凈化處理：EB含量大干0.5μg/ml溶液先用水將EB濃度稀釋至0.5μg/ml以下，每100ml溶液加入100mg活性碳。不時輕輕搖蕩混勻，室溫放置1小時，濾紙過濾將活性碳與濾紙密封在塑料袋中作為有害廢物丟棄?；蛴脤Ｓ靡淮涡匀玖锨宄℅ene有限公司）吸附過夜，再焚燒袋子即可。EB接觸物，如抹布、槍頭等埋入地下。
4.3.2 Trizol：提取組織和細胞RNA的一種重要試劑，在提取RNA時一定要在通風進行。如皮膚接觸Trizol，請立即用大量去垢劑和水沖洗，廢液埋入地下。
4.3.3 DEPC(Diethylprocarbonate，二乙基焦碳酸酯)：RNA酶的強抑制劑，一種潛在的致癌物質。操作時戴口罩。在通風櫥中進行。沾到手上立即沖洗，廢液通過廢液道排泄。
4.3.4 CHCl3(ChIoroform，氯仿)：常用于DNA和RNA提取，對皮膚、眼睛、黏膜和呼吸道有強烈的刺激作用和腐蝕性，易損害肝和腎。操作時戴手套在通風櫥里進行，廢液收集后埋入地下。
4.3.5 Acrylamide（丙烯酰胺）：DNA測序、SSR及蛋白質分離等技術中作電泳支持物，具神經(jīng)毒性，聚合后毒性消失。操作時戴手套在通風櫥內進行，聚合后的聚丙烯酰胺凝膠沒有毒性，可隨普通垃圾一起扔掉，千萬不要倒入下水道。
3.分子生物學實驗室一般有哪些注意事項
目前，分子生物學飛速發(fā)展，分子生物學相關的理論和技術已深入到生命科學的各個領域，一些常用的技術，如基因組DNA的分離純化，質粒DNA的抽提及純化，RNA的提取，PCR擴增，Southern blot等成為分子生物學研究的強有力工具，為分子生物學的發(fā)展起了巨大的推動作用，然后，這些實驗操作技術都涉及到氯仿、DEPC、同位素等有毒有害或具放射性的物質，對環(huán)境和人身安全也造成巨大的威脅。
因此，弄清這些有害有毒物質的作用，加強實驗室安全管理，建立良好的制度和處理，保證分子生物學實驗室成為真正的科研陣地。放射性物質的處理：放射性同位素技術具有靈敏、簡便和廉價等優(yōu)點，在分子生物學實驗室應用普遍，但由于放射性同位素的輻射會給人體造成損傷，如果使用不當或操作不規(guī)范，會造成環(huán)境污染，甚至損傷人員。
在進行同位素操作時一定要注意個人防護，包括使用隔離、專用衣帽手套及防護背心、擋板等。對放射性同位素的污染進行安全性教育，實行責任到人的做法，對放射性物質統(tǒng)一保管、集中存放、集中處理的做法。
在定購同位素時，根據(jù)需要量進行訂購。α-31p半衰期為14.5天，在southern blotting應用較廣，是危害較大的放射性物質。
DNA雜交時，在探針標記、洗膜等幾個階段都涉及同位素。對含α-31p固體廢物，放入鐵皮箱10個半衰期（約半年）后埋到指定的地點：對于含α-31p濃度較高的液體廢物（如首次洗膜液），在厚實的朔料桶放置8個半衰期后倒入專用的下水道；含α-31p濃度較低的液體廢物（如二、三次洗膜液），則直接倒入專用的下水道。
4.3常見的有毒物質的處理：溴化乙錠、Trizol、丙烯酰氨、DEPC、甲酰氨等毒性高、環(huán)境危害大的物質，分類收集后統(tǒng)一處理。 4.3.1 EB(Ethidiunl bromide，溴化乙錠)：EB是一種強烈誘變劑并有中度毒性，應戴手套操作，對于含有EB的溶液也不應直接倒下水道，用后妥善凈化處理：EB含量大干0.5μg/ml溶液先用水將EB濃度稀釋至0.5μg/ml以下，每100ml溶液加入100mg活性碳。
不時輕輕搖蕩混勻，室溫放置1小時，濾紙過濾將活性碳與濾紙密封在塑料袋中作為有害廢物丟棄。或用專用一次性染料清除袋（Gene有限公司）吸附過夜，再焚燒袋子即可。
EB接觸物，如抹布、槍頭等埋入地下。 4.3.2 Trizol：提取組織和細胞RNA的一種重要試劑，在提取RNA時一定要在通風進行。
如皮膚接觸Trizol，請立即用大量去垢劑和水沖洗，廢液埋入地下。 4.3.3 DEPC(Diethylprocarbonate，二乙基焦碳酸酯)：RNA酶的強抑制劑，一種潛在的致癌物質。
操作時戴口罩。在通風櫥中進行。
沾到手上立即沖洗，廢液通過廢液道排泄。 4.3.4 CHCl3(ChIoroform，氯仿)：常用于DNA和RNA提取，對皮膚、眼睛、黏膜和呼吸道有強烈的刺激作用和腐蝕性，易損害肝和腎。
操作時戴手套在通風櫥里進行，廢液收集后埋入地下。 4.3.5 Acrylamide（丙烯酰胺）：DNA測序、SSR及蛋白質分離等技術中作電泳支持物，具神經(jīng)毒性，聚合后毒性消失。
操作時戴手套在通風櫥內進行，聚合后的聚丙烯酰胺凝膠沒有毒性，可隨普通垃圾一起扔掉，千萬不要倒入下水道。
4.分子生物學實驗基本操作規(guī)程
第3章 分子生物學實驗基本操作技術 這里的實驗基本操作技術是指在分子生物學實驗中使用范圍最廣、使用頻率最高、幾乎所有實驗都要應用的技術。
器皿的清洗，試管、量筒（杯）、容量瓶、吸管及移液器、電子天平等量具的正確操作和使用、試劑配制等技術，應當都是基本操作技術，但這些內容已在分析化學、生物化學的實驗課程中作了詳細介紹。本章主要介紹與分子生物學實驗有關的除（滅）菌技術、無菌操作技術和微量操作技術。
3.1 除（滅）菌技術 在進行分子生物學實驗過程中，需要一個清潔的實驗環(huán)境，所使用的器皿及溶液均需要進行除（滅）菌處理，一方面避免環(huán)境中微生物的污染，另一方面還可消除蛋白酶和核酸酶對實驗的干擾和影響。在進行微生物及細胞的純培養(yǎng)時要求更高，不能有任何外來雜菌。
因此，對所有器材、培養(yǎng)基要進行嚴格滅菌，對工作場所進行消毒，保證工作順利進行。實驗室常用的除滅菌方法主要有物理方法及化學方法兩種。
物理方法包括用濕熱（高壓蒸汽）、干熱、紫外線、過濾、離心沉淀等方法除去微生物；化學方法是使用化學消毒劑、抗菌素等殺死或抑制微生物。根據(jù)被滅菌物品的材料性質和實驗要求，可采取不同的消毒滅菌方法。
3.1.1 物理滅菌法 （1）干熱滅菌：干熱滅菌包括火焰灼燒滅菌和熱空氣滅菌?；鹧孀茻m用于金屬用具，如接種環(huán)、接種針和手術器械等，玻璃器皿的口頸，如試管口和瓶口，玻璃棒等的滅菌處理。
這種方法滅菌迅速徹底。熱空氣滅菌一般在烤箱中進行，利用高溫干燥空氣（160℃?170℃）加熱滅菌1?2h，適用于玻璃器皿和培養(yǎng)皿等。
干熱消毒后的器皿干燥，易于保存。缺點是干熱傳導慢，可能有冷空氣存留于烤箱內，因此要求較高的溫度和較長的時間才能達到消毒的目的。
應當注意，干烤滅菌完畢后不得馬上將烤箱門打開，須等溫度降至70℃以下時再開箱門，以免冷空氣突然進入，影響消毒效果和損壞玻璃器皿或發(fā)生意外事故。在滅菌時，物品不能放的太擠。
滅菌的玻璃器皿中不可有水，有水的玻璃器皿在干熱滅菌時容易炸裂。培養(yǎng)基、橡膠制品、塑料制品不能用此方法消毒。
（2）濕熱滅菌：在相同溫度下，濕熱的滅菌效力比干熱滅菌好。原因是：（1）熱蒸汽對細胞成分的破壞作用更強。
水分子的存在有助于破壞維持蛋白質三維結構的氫鍵和其他相互作用弱鍵，更易使蛋白質變性。加熱使蛋白質變性，與水的含量有關，當環(huán)境和細胞含水量越大，凝固越快。
蛋白質含水量與其凝固溫度成反比；（2）熱蒸汽比熱空氣穿透力強，能更有效地殺滅微生物；（3）蒸汽存在潛能，當氣體轉變成液體時可放出大量熱能，故可更迅速提高滅菌物體的溫度。濕熱滅菌常用的方法有高壓蒸汽滅菌、常壓蒸汽滅菌和煮沸滅菌。
其中高壓蒸汽滅菌法最為常用，效果最好。常壓蒸汽滅菌法不能在短時間內殺死細菌芽孢，必須采取間歇滅菌或持續(xù)滅菌的方法，才能達到完全滅菌。
而煮沸滅菌僅用于注射器及某些用具的滅菌，被滅菌物品的濕度太大。所以，這兩種方法較少使用。
高壓蒸氣滅菌是在密閉的高壓蒸汽鍋中進行的。其原理是：將待滅菌的物體放置在盛有適量水的高壓蒸汽滅菌鍋內，將鍋內的水加熱煮沸，并把其中原有的冷空氣徹底驅盡后將鍋密閉，再繼續(xù)加熱就會使鍋內的蒸汽壓逐漸上升，從而使溫度也隨之上升到100℃以上。
滅菌時，根據(jù)不同的物品選擇不同壓力和時間，一般物品（如布類、金屬器械、玻璃器皿等）消毒的要求是0.15MPa下15min，培養(yǎng)液和橡膠制品為0.1MPa下10min。滅菌前在鍋內加適量的水，加水過少，易將滅菌鍋燒干，引起炸裂事故。
加水過多有可能引起滅菌物品浸水。物品不能裝得過滿，以免影響消毒器內氣體流通。
導氣管要伸至罐底并防止堵塞。在加熱升壓之前，先要打開排氣閥門排放消毒器內的冷空氣，冷空氣排出后，關閉排氣閥門，同時檢驗安全閥活動自如，開始升壓，當達到所需壓力時，開始計時，并控制壓力恒定。
滅菌過程中，操作者不能離開工作崗位，要定時檢查壓力及安全，防止意外事件發(fā)生。滅菌完畢后一定要先打開閥門放氣，當滅菌鍋內壓力下降到“0”時，再打開滅菌鍋的蓋。
也可在滅菌完畢后，關閉電源總閥，讓滅菌物品自然冷卻，待滅菌鍋壓力表降至“0”時，再取出滅菌物品。蒸汽壓力與溫度的關系 蒸汽壓力（表壓） 蒸汽溫度 Kg/cm2 MPa ℃ ℉0.00 0.00 100 2120.25 0.025 107.0 2240.50 0.050 112.0 2340.75 0.075 115.5 2401.00 0.100 121.0 2501.50 0.150 128.0 2622.00 0.200 134.5 274 (3)紫外線殺菌： 紫外線的波長范圍是200?300nm，殺菌范圍為240?280nm，其中波長在260nm左右的紫外線殺菌作用最強。
紫外燈是人工制造的低壓水銀燈，能輻射出257.3nm的紫外線，殺菌能力強且較穩(wěn)定。紫外線殺菌作用是因為它可以被蛋白質（波長為280nm）和核酸（波長為260nm）吸收，造成這些分子的變性失活。
紫外線穿透能力很差，不能穿透玻璃、衣物、紙張和大多數(shù)其他物體，但能穿透空氣，主要用于實驗室空氣、操作臺表面和不能使用其它方法進行滅菌的物品。紫外線直接照射方便、效果好，經(jīng)一定的時間照射后，可以消滅空氣。
