二、紅細胞標本問題 未加入抗體或血清 實驗溫度(37℃凝集會下降) 未識別溶血 血清與紅細胞比例不當 離心速度、時間不夠 使用失效或錯誤試劑 實驗結(jié)果記錄、解釋錯誤 離心速度過大、時間過長 使用了受到細菌污染的試劑 試驗器皿不干凈 實驗結(jié)果記錄、解釋錯誤 患者近期接受了大量ABO血型相容但不同型的紅細胞,如骨髓移植患者,或非O型人接受O型紅細胞 某些ABO基因變異的個體或ABO亞型紅細胞,一些白血病或其他惡性疾病患者的紅細胞ABO抗原太弱,應(yīng)用抗-A、抗-B試劑未能出現(xiàn)預(yù)期的凝集反應(yīng) 紅細胞獲得性或遺傳性的異常,如獲得性B抗原紅細胞或Tn/T多凝集紅細胞,人血清抗-A、抗-B試劑可能與這些異常的紅細胞反應(yīng) 使用未洗滌的紅細胞標本,其表面黏附的血漿或血清中含針對抗-A、抗-B試劑中染色劑或其他成分的抗體,出現(xiàn)假陽性反應(yīng) 患者血清中高活性、高濃度冷自身抗體嚴重致敏(包被)自身紅細胞,以至自發(fā)地發(fā)生凝集,而不是抗體試劑的特異性免疫反應(yīng)所致 紅細胞表面包被IgG類抗體 三、血清標本的問題 小的纖維蛋白凝集的紅細胞凝塊被誤認為是血液凝集,如使用血漿標本或未完全去除纖維蛋白的血清標本時。
免疫抑制疾病患者血清中ABO抗體減少或消失。老年人ABO抗體減弱 4-6月齡內(nèi)嬰兒血清中ABO抗體陰性或很弱,一般只測正定 血清中不正常濃度和比例的蛋白質(zhì)成分或高分子蛋白增多可引起非特異凝集,如緡錢狀紅細胞的非特異凝集。
血清中含抗-A、抗-B以外的其他紅細胞抗體,如抗-M、抗-I等。 患者接受了ABO血型不同的骨髓移植 患者血清中含有針對紅細胞保護劑的抗體 大量C 1分子由于異常高效價的補體結(jié)合抗體抗-A、抗-B作用,結(jié)合到紅細胞膜上,遮蔽了A、B抗原位點,不發(fā)生凝集 四、分析和處理 1.重新采集標本,以避免采集、標記、污染等錯誤 2.查詢患者既往病史、輸血史、用藥史、骨髓移植史 3.徹底洗滌標本或試劑紅細胞 4.應(yīng)用抗-AB、抗-A1、或抗-H檢測紅細胞 5.分析抗篩結(jié)果,確定結(jié)果是否受同種異型或自身冷抗體干擾 6.室溫孵育30min后,離心觀察結(jié)果,以檢測弱的抗原抗體反應(yīng) 7. 做自身紅細胞做對照,以確定自身抗體的干擾 意外的血清學反應(yīng)所致的ABO正反定不符 抗體太弱或消失 非正常高濃度的抗-A、抗-B可引起前帶現(xiàn)象 A2、A2B或其他ABO亞型人血清中可能有抗-A1 患者血漿蛋白濃度過高或靜脈輸用了大量大分子藥物等原因,可發(fā)生類似凝集現(xiàn)象,如緡錢狀凝集 冷自身抗體,如抗-I、抗-IH、抗-IA等 自身免疫性溫型抗體 同種抗體/意外抗體 五、ABO正反定不符及其處理 1.抗體太弱或消失 如新生兒、老年人、免疫抑制患者,應(yīng)注意患者的年齡和診斷 2.非正常高濃度的抗-A、抗-B可引起前帶現(xiàn)象,導(dǎo)致假陰性,將血清稀釋或用EDTA(2.5%)處理可消除 3.A2、A2B或其他ABO亞型人血清中可能有抗-A1, 抗-A1只凝集A1型紅細胞而不凝集A2、O型紅細胞 4.患者血漿蛋白濃度過高或靜脈輸用了大量大分子藥物等原因,可發(fā)生類似凝集現(xiàn)象,如緡錢狀凝集 將血清用生理鹽水稀釋3倍或用鹽水替換技術(shù)可消除 5.冷自身抗體,如抗-I、抗-IH、抗-IA等(自凝) a.所有試劑及細胞37℃孵育,37℃下判讀結(jié)果 b.將冷自身抗體吸收 c.將血清用0.01mol/L DTT處理和再定型 6.自身免疫性溫型抗體 自身免疫性溶血性貧血病人血清中可有溫型自身抗體,37℃反應(yīng)比室溫強 血清能凝集自身和其他各型紅細胞,若紅細胞上吸附自這種自身抗體,在自身或他人血清中均可出現(xiàn)凝集,正定被誤認為AB型,反定被誤認為O型。
用遞增溫度(22℃,37℃,45℃)洗滌紅細胞后再做血型鑒定 7.同種抗體/意外抗體 室溫下抗-P、抗-M、抗E等,可能出現(xiàn)意外反應(yīng),干擾ABO血型鑒定 抗體特異性抗體鑒定,選擇抗原陰性的紅細胞做反定。
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收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原,無內(nèi)毒素試管。
2.血清和血漿避免使用溶血,高血脂標本。
3.標本應(yīng)清澈透明,懸浮物應(yīng)離心去除。
4.標本收集后若不及時檢測,需按一次使用量分裝,凍存于-20℃,-80℃電冰箱內(nèi),避免反復(fù)凍融。
5.可根據(jù)標本的實際情況,做適當倍數(shù)稀釋(建議做預(yù)實驗,以確定稀釋倍數(shù)) 。
6.收集標本,盡量做到雙份的用量,避免一次實驗失敗,重復(fù)實驗時標本缺失,從而耽誤實驗進程。
7.收集標本時,應(yīng)該做好防護措施(比如戴手套,口罩,護目鏡等),認為所有標本都具有一定的潛在危險性。
8.樣本處理應(yīng)該在生物安全柜里面,并且正確使用生物安全柜。</ol>;樣本正確的處理方法應(yīng)該是這樣的:
【標本處理辦法】
血清:將采集的全血靜置冰箱4℃過夜,然后1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。
2.血漿:用EDTA,枸櫞酸鈉,肝素等作為抗凝劑,加入血液混勻后,1000-3000rpm離
心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)
保存。
3.組織勻漿:切取組織塊,0.01MPBS中過洗一次;按照1G組織加入5-10ml組織蛋白萃取試劑的比例,在冰水中勻漿。勻漿完成后,5000-10000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。
4.細胞培養(yǎng)上清:1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。
5.尿液,腹水,腦脊液等:1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃3-6個月)保存。</ol>;注:樣品稀釋的一般原則
用戶須查閱相關(guān)文獻了解標本內(nèi)待測因子的含量,決定適當?shù)南♂尡稊?shù),以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA試劑盒的最佳檢測范圍。樣品的稀釋應(yīng)有詳細記錄。希望可以給您提供幫助,祝您科研順利!
血流感染是一種嚴重的全身感染性疾病,早期快速診斷并及時治療對患者預(yù)后至關(guān)重要。
血培養(yǎng)是目前診斷血流感染最直接和最可靠的方法,血培養(yǎng)標本質(zhì)量的好壞直接影響診斷的準確性,故在血液標本采集過程中應(yīng)掌握如下要點。(1) 采血時機:盡可能在患者寒戰(zhàn)開始時,發(fā)熱高峰前30~60分鐘內(nèi)采血;在使用抗菌藥物治療前采集血液標本,如患者已經(jīng)使用抗菌藥物治療,應(yīng)在下一次用藥之前采集血標本。
臨床往往存在經(jīng)驗性用藥后病情未得到緩解時才會考慮血培養(yǎng),但是由于已經(jīng)應(yīng)用了廣譜抗菌藥物,細菌大多被殺滅或抑制,血培養(yǎng)結(jié)果往往為“無細菌生長”,因此,掌握正確的采血時機至關(guān)重要。(2) 采血部位:通常為肘靜脈。
切忌在靜滴抗菌藥物的靜脈處采血;不應(yīng)從留置靜脈或動脈導(dǎo)管內(nèi)取血,除非懷疑有導(dǎo)管相關(guān)的血流感染,因為導(dǎo)管常伴有定植菌存在。 (3) 采血工具:建議采用商業(yè)化的真空血培養(yǎng)瓶。
如果血培養(yǎng)瓶的儲存溫度為 2~8丈,應(yīng)先將血培養(yǎng)瓶在室溫放置30分鐘左右,平衡至室溫再采血。同一部位采集兩瓶血培養(yǎng)時不建議更換針頭。
(4) 采血次數(shù)、血培養(yǎng)瓶的選擇:對于成人患者,應(yīng)同時分別在兩個部位采集血標本;每個部位需氧和厭氧培養(yǎng)各一瓶。 對于兒童患者,應(yīng)同時分別在兩個部位采集血標本,分別注人兒童瓶,一般不需要厭氧瓶,除非懷疑患兒存在厭氧菌血流感染。
(5) 采血量:成人每次每培養(yǎng)瓶應(yīng)采血5~10ml(合計20~40 ml);嬰幼兒根據(jù)患兒的體重確定采血總量,每培養(yǎng)瓶(兒童瓶)采血2~4 ml。 采血量是影響血培養(yǎng)檢出陽性率的重要因素,采血量過少會明顯降低血培養(yǎng)陽性率。
國內(nèi)大多數(shù)醫(yī)療機構(gòu)不能完全做到雙側(cè)部位采血、留取雙套血液標本,這不利于血培養(yǎng)陽性率的提高。(6) 皮膚、血培養(yǎng)瓶消毒:為減少皮膚、培養(yǎng)瓶口等對血培養(yǎng)造成的污染,在穿刺前,應(yīng)對皮膚和培養(yǎng)瓶口進行消毒并充分干燥,以減少假陽性的發(fā)生概率。
(7) 避免采血管內(nèi)空氣注人厭氧血培養(yǎng)瓶。(8) 避免在靜脈留置導(dǎo)管連接處(如肝素帽處)采集血標本。
避免標本污染。
這個問題由武漢新啟迪生物來為您解答。
做ELISA實驗,在處理樣本前應(yīng)該先了解收集樣本的注意事項。 【標本收集注意事項】 收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原,無內(nèi)毒素試管。
2.血清和血漿避免使用溶血,高血脂標本。 3.標本應(yīng)清澈透明,懸浮物應(yīng)離心去除。
4.標本收集后若不及時檢測,需按一次使用量分裝,凍存于-20℃,-80℃電冰箱內(nèi),避免反復(fù)凍融。 5.可根據(jù)標本的實際情況,做適當倍數(shù)稀釋(建議做預(yù)實驗,以確定稀釋倍數(shù)) 。
6.收集標本,盡量做到雙份的用量,避免一次實驗失敗,重復(fù)實驗時標本缺失,從而耽誤實驗進程。7.收集標本時,應(yīng)該做好防護措施(比如戴手套,口罩,護目鏡等),認為所有標本都具有一定的潛在危險性。
8.樣本處理應(yīng)該在生物安全柜里面,并且正確使用生物安全柜。樣本正確的處理方法應(yīng)該是這樣的: 【標本處理辦法】 血清:將采集的全血靜置冰箱4℃過夜,然后1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。
2.血漿:用EDTA,枸櫞酸鈉,肝素等作為抗凝劑,加入血液混勻后,1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。3.組織勻漿:切取組織塊,0.01MPBS中過洗一次;按照1G組織加入5-10ml組織蛋白萃取試劑的比例,在冰水中勻漿。
勻漿完成后,5000-10000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。4.細胞培養(yǎng)上清:1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。
5.尿液,腹水,腦脊液等:1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃3-6個月)保存。注:樣品稀釋的一般原則 用戶須查閱相關(guān)文獻了解標本內(nèi)待測因子的含量,決定適當?shù)南♂尡稊?shù),以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA試劑盒的最佳檢測范圍。
樣品的稀釋應(yīng)有詳細記錄。 希望可以給您提供幫助,祝您科研順利。
采血過程注意事項
采血而要注意的問題包括:采血部位、采血時患者的體位、止血帶的影響、輸液的影響、抗凝劑的種類和量的影響。
1.采血部位
不同采血部位采集的血標本,會檢測出不同的結(jié)果。同一患者同一項目,今天從手指采集血樣,明天從靜脈采集血樣,是不合理的。從同一患者手指、靜脈采集的血標本用于血常規(guī),結(jié)果就不一樣。
2.止血帶的影響
止血帶壓迫時間40秒,總蛋白增加4%、天門冬氨酸轉(zhuǎn)移酶(AST)增加16%;超過3分鐘,局部血液濃縮,血清鐵,血清鈣、酸性磷酸酶(ACP)、血鉀升高,乳酸升高,PH值減低。
3.患者體位
患者在臥位、坐位、立們不同姿勢,護士采集的標本,檢驗結(jié)果不同時。正常人立位血漿總量比臥位減少12%左右,引起紅蛋白(Hb)、白細胞(WBC)、紅細胞(RBC)、紅細胞比容(HCT)、脂類、蛋白等值變化。止血時間過長會引起凝血系統(tǒng)變化,反復(fù)攥拳會使血鉀升高。
采血操作步驟
1. 讓病人坐直或平躺,保持合適的體位,利于護士操作為宜且充分暴露采血部位。
2. 讓病人衣著應(yīng)寬松,袖口不宜過緊,以免采血后血管仍然充血引起出血或皮下血腫。
3. 記得要叮囑患者“按壓針眼處5-10分鐘”,避免血腫引起醫(yī)患糾紛。
4. 避免在患皮膚病、皮膚損傷的部位或有瘢痕的部位抽血,以免引起感染。
注意事項
1. 嚴格無菌操作技術(shù),徹底消毒皮膚,消毒范圍8~10cm,消毒后手指不得觸摸穿刺部位,采血過程中采血者須經(jīng)常用乙醇棉球或0.2%過氧乙酸液浸泡的毛巾擦拭雙手,盡量保持手指無菌。
2. 采血時血流不暢應(yīng)注意查找原因:
①針頭在靜脈內(nèi)位置不當,針頭斜面被靜脈壁或瓣阻擋;
②穿刺過深或針頭斜面未全部進入靜脈內(nèi);
③采血導(dǎo)管被擠壓粘連或彎曲變形;
④止血帶壓力不足或過高,造成表淺靜脈不充盈或深部靜脈回流受阻;
⑤獻血者精神緊張,出現(xiàn)獻血反應(yīng),造成靜脈痙攣或塌陷。針對上述原因作及時處理,保持血流通暢。
3. 認真核對袋簽、管簽上的編號、姓名和血型是否一致,如有標簽脫落,須從血袋內(nèi)重新抽血樣復(fù)查肝功及血型,結(jié)果一致后方可送出。
采血
釋義:
因檢驗或相關(guān)需要,由醫(yī)務(wù)人員經(jīng)靜脈、動脈采取血液標本的過程。
方法:
采血由醫(yī)護人員并經(jīng)專門采血技術(shù)培訓(xùn)的人員來承擔,未經(jīng)專門培訓(xùn)不得上崗;采血技術(shù)的熟練程度,直接關(guān)系到血液的質(zhì)量和獻血者的身體健康,所以要求每位采血人員必須熟練掌握采血技術(shù)。
獻血者的護理
①獻血后,敷蓋在針眼上的棉球、膠布須保留4h以上,以免針眼感染。
②檢查穿刺部位有無滲血或出血,若有出血應(yīng)抬高手臂,并繼續(xù)壓迫局部。
獻血者的選擇
①年齡 男18~55歲,女18~50歲。超過此年齡者,如果本人自愿、單位同意、體檢合格、經(jīng)醫(yī)師審定后,男女各可放寬5歲。
②身體健康,無下列病史 病毒性肝炎 (甲型肝炎痊愈1年,經(jīng)3次化驗血陰性者可獻血)、瘧疾(停止治療后3年并無瘧疾癥狀者可獻血)、血吸蟲病(1年前患過血吸蟲病,已痊愈,無肝、脾腫大,又無臨床癥狀者可獻血)、肺結(jié)核?。ㄒ阎斡?,不再有活動性2年之后,可獻血)、性病史或梅毒抗體陽性、艾滋病史或HIV抗體陽性、惡性腫瘤、重度變態(tài)反應(yīng)病、精神失常、經(jīng)常頭痛或暈厥、心腦血管疾病、肝腎、血液、內(nèi)分泌代謝疾病,接受主要臟器切除治療及其他重要病史。
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