植物組織培養(yǎng)包括2個過程,脫分化和再分化。
1.外植體(被培養(yǎng)的組織塊--葉片碎片植物組織培養(yǎng)的過程、莖尖、幼胚等或細胞--去壁的葉肉細胞)細胞恢復(fù)分裂,形成大量的細胞--愈傷。這個過程是脫分化。由于是已經(jīng)成熟的細胞脫離了成熟細胞的狀態(tài),回到類似胚胎階段的狀態(tài),故稱脫分化。
2.愈傷組織的細胞經(jīng)過誘導(dǎo),分化形成根、莖、葉等器官甚至形成類似種子中的胚一樣的結(jié)構(gòu)--胚狀體(體胚),這個過程就是再分化。
一個完整的植物組織培養(yǎng)過程一般包括以下幾個步驟:
(1)準備階段
查閱相關(guān)文獻,根據(jù)已成功培養(yǎng)的相近植物資料,結(jié)合實際制訂出切實可行的培養(yǎng)方案。然后根據(jù)實驗方案配制適當?shù)幕瘜W(xué)消毒劑以及不同培養(yǎng)階段所需的培養(yǎng)基,并經(jīng)高壓滅菌或過濾除菌后備用。
(2)外植體選擇與消毒
選擇合適的部位作為外植體,采回后經(jīng)過適當?shù)念A(yù)處理,然后進行消毒處理。將消毒后的外植體在無菌條件下切割成一定大小的小塊,或剝離出莖尖,挑出花藥,接種到初代培養(yǎng)基上。
(3)初代培養(yǎng)
接種后的材料置于培養(yǎng)室或光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng),促使外植體中已分化的細胞脫分化形成愈傷組織,或頂芽、腋芽直接萌發(fā)形成芽。然后將愈傷組織轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基分化成不同的器官原基或形成胚狀體,最后發(fā)育形成再生植株。
(4)繼代培養(yǎng)
分化形成的芽、原球莖數(shù)量有限,采用適當?shù)睦^代培養(yǎng)基經(jīng)多次切割轉(zhuǎn)接。當芽苗繁殖到一定數(shù)量后,再將一部分用于壯苗生根,另一部分保存或繼續(xù)擴繁。進行脫毒苗培養(yǎng)的需提前進行病毒檢測。
(5)生根培養(yǎng)
剛形成的芽苗往往比較弱小,多數(shù)無根,此時可降低細胞分裂素濃度或不加,提高生長素濃度,促進小苗生根,提高其健壯度。
(6)煉苗移栽
選擇生長健壯的生根苗進行室外煉苗,待苗適應(yīng)外部環(huán)境后,再移栽到疏松透氣的基質(zhì)中,注意保溫、保濕、遮蔭,防止病蟲危害。當組培苗完全成活并生長一定大小后,即可移向大田用于生產(chǎn)。
如:莖尖→表面消毒→接種誘導(dǎo)培養(yǎng)基→莖尖生長→病毒檢測鑒定→培養(yǎng)無根小植株→培養(yǎng)生根→完整小植株→煉苗20-25天→移栽成活。
對不同的品種詞流程會略有差異,如進行果樹育苗還需進行嫁接等操作流程,但對組培工廠化育苗而言,一般可根據(jù)上面的流程圖來安排各項作業(yè),只有相互銜接好、配合好,才能提高生產(chǎn)效益。
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