核酸含量的測定方法各有何優(yōu)缺點(diǎn)(測定核酸含量的方法)
1.測定核酸含量的方法有哪些
核酸中的有機(jī)無機(jī)磷酸——→無機(jī)磷酸+鉬酸——→磷鉬酸+還原劑（抗壞血酸等）——→鉬蘭
鉬蘭的最大吸收波長在660nm，在一定濃度范圍內(nèi)，溶液的吸收值與無機(jī)磷的含量成正比。該法測得的是總磷量，需減去無機(jī)磷的含量才是核酸的含磷量。
（二）定糖法
核酸中的戊糖可在濃鹽酸或濃硫酸作用下脫水生成醛類化合物，醛類化合物可與某些成色劑縮合成有色化合物，可用比色法或分光光度法測定其溶液中的吸收值，在一定濃度范圍內(nèi)，溶液的吸收值與核酸的含量成正比。
1、核糖的測定
生成的綠色化合物在λ=670nm處有最大的吸收值。
2、脫氧核糖的測定
DNA中的脫氧核糖可在濃硫酸作用下脫水生成ω-羥基-γ-酮戊酸，該化合物可與二苯胺生成蘭色化合物，在λ=595nm處有最大吸收值。
（三）紫外吸收法
根據(jù)核酸分子中的嘌呤環(huán)和嘧啶環(huán)在λ=260nm處有最大吸收值，可采用紫外分光光度法測定核酸的含量。
2.紫外可見分光光度計(jì)法測核酸含量有何優(yōu)缺點(diǎn)
方便，靈敏，除了知道含量，還知道組成成分。
從吸收光譜中，可以確定最大吸收波長λmax和最小吸收波長λmin。物質(zhì)的吸收光譜具有與其結(jié)構(gòu)相關(guān)的特征性。
可以通過特定波長范圍內(nèi)樣品的光譜與對照光譜或?qū)φ掌饭庾V的比較，或通過確定最大吸收波長，或通過測量兩個特定波長處的吸收比值而鑒別物質(zhì)。
在最大吸收波長處測量一定濃度樣品溶液的吸光度，并與一定濃度的對照溶液的吸光度進(jìn)行比較或采用吸收系數(shù)法求算出樣品溶液的濃度。
擴(kuò)展資料：
物質(zhì)對光的選擇性吸收波長，以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。在一定條件下，物質(zhì)的吸收系數(shù)是恒定的，且與入射光的強(qiáng)度、吸收池厚度及樣品濃度無關(guān)。當(dāng)已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后，可用同樣條件將該供試品配成溶液，測定其吸光度。
即可由上式計(jì)算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見光區(qū)，除某些物質(zhì)對光有吸收外，很多物質(zhì)本身并沒有吸收，但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過處理使其顯色后再測定，故又稱之為比色分析。
參考資料來源：百度百科-紫外-可見分光光度法
3.核酸含量的測定方法及原理都有哪些
核酸定量常用方法及原理如下： 1、光吸收法：核酸中堿基共軛結(jié)構(gòu)在近紫外光波長260nm處有最大吸收，吸收強(qiáng)度與核酸濃度成正比，因此可以用于核酸定量。
2、定P法：核酸中P含量約為9.5%，因此可以通過測定樣品中的有機(jī)P量來進(jìn)行核酸定量。核酸是由許多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，為生命的最基本物質(zhì)之一。
核酸廣泛存在于所有動植物細(xì)胞、微生物體內(nèi)，生物體內(nèi)的核酸常與蛋白質(zhì)結(jié)合形成核蛋白。不同的核酸，其化學(xué)組成、核苷酸排列順序等不同。
根據(jù)化學(xué)組成不同，核酸可分為核糖核酸（簡稱RNA）和脫氧核糖核酸（簡稱DNA）。
4.核酸含量測定的方法和原理都有哪些
核酸定量常用方法及原理如下： 1、光吸收法：核酸中堿基共軛結(jié)構(gòu)在近紫外光波長260nm處有最大吸收，吸收強(qiáng)度與核酸濃度成正比，因此可以用于核酸定量。
2、定P法：核酸中P含量約為9.5%，因此可以通過測定樣品中的有機(jī)P量來進(jìn)行核酸定量。核酸是由許多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，為生命的最基本物質(zhì)之一。
核酸廣泛存在于所有動植物細(xì)胞、微生物體內(nèi)，生物體內(nèi)的核酸常與蛋白質(zhì)結(jié)合形成核蛋白。不同的核酸，其化學(xué)組成、核苷酸排列順序等不同。
根據(jù)化學(xué)組成不同，核酸可分為核糖核酸（簡稱RNA）和脫氧核糖核酸（簡稱DNA）。
5.用紫外分光光度法測定核酸的缺點(diǎn)有哪些
核酸、核苷酸及其衍生物的分子結(jié)構(gòu)中的嘌呤、嘧啶堿基具有共軛雙健系統(tǒng)（-C=C一C=C 一），能夠強(qiáng)烈吸收250~280nm 波長的紫外光.核酸（DNA,RNA）的最大紫外吸收值在260nm 處.遵照Lambert-Beer 定律，可以從紫外光吸收值的變化來測定核酸物質(zhì)的含量.
在不同pH 溶液中嘌呤、嘧啶堿基互變異構(gòu)的情況不同，紫外吸收光也隨之表現(xiàn)出明顯的差異，它們的摩爾消光系數(shù)也隨之不同.所以，在測定核酸物質(zhì)時(shí)均應(yīng)在固定的pH溶液中進(jìn)行.
核酸的摩爾消光系數(shù)（或吸收系數(shù)），通常以ε（ρ）來表示，即每升含有一摩爾核酸磷的溶液在260nm 波長處的消光值（即光密度，或稱為光吸收）.核酸的摩爾消光系數(shù)不是一個常數(shù)，而是依賴于材料的前處理、溶液的pH 和離子強(qiáng)度發(fā)生變化.它們的經(jīng)典數(shù)值（pH = 7.0）如下：
DNA 的ε（ρ）= 6 000 8 000
RNA 的ε（ρ）= 7 000 10 000
小牛胸腺DNA 鈉鹽溶液（pH = 7.0）的ε（ρ）= 6 600,DNA 的含磷量為9.2%，含1μg/mL DNA 鈉鹽的溶液光密度為0.020.RNA 溶液（pH = 7.0）的ε（ρ）= 7 700~7 800,RNA 的含磷量為9.5%，含1μg /mL RNA 溶液的光密度為0.022~0.024.采用紫外分光光度法測定核酸含量時(shí)，通常規(guī)定：在260nm 波長下，濃度為1μg/mL 的 DNA 溶液其光密度為0.020，而濃度為1μg/mL 的RNA 溶液其光密度為0.024.因此，測定未知濃度的DNA (RNA)溶液的光密度OD260nm，即可計(jì)算測出其中核酸的含量.該法簡單、快速、靈敏度高，如核酸3μg/mL 的含量即可測出.對于含有微量蛋白質(zhì)和核苷酸等吸收紫外光物質(zhì)的核酸樣品，測定誤差較小，若樣品內(nèi)混雜有大量的上述吸收紫外光物質(zhì)，測定誤差較大，應(yīng)設(shè)法事先除去.
由于降解或水解作用，核酸的光密度可以增高約40%，這就是眾所周知的增色效應(yīng)（hyperchromic effect）.在大分子的核酸中，氫鍵和π-鍵相互作用改變了堿基的共振行為.因此，核酸的光密度低于構(gòu)成它的核苷酸的光密度，該現(xiàn)象稱為減色效應(yīng)（hypochromic effect）.
