目前臨床正在使用和研究的耐藥性檢測方法歸納起來,有表型檢 測和基因檢測兩大類。
表型檢測方法有常規(guī)藥敏試驗方法、BACTE- CTB-960放射性液體培養(yǎng)基法、噬菌體生物擴增法、熒光素酶信號噬菌 體法(LRP)、MTT法、流式細胞儀(FCM)測定法等?;驒z測方法有 直接測序法(DS)、聚合酶鏈反應-單鏈構象多態(tài)性分析(PCR-SSCP)、PCR-限制性片段長度多態(tài)性分析(PCR-RFLP)、雙脫氧指紋圖法 (ddF)、反向系列探針雜交法(AiPA)、異源雙鏈形成法(HDF)、隨機擴 增多態(tài)性DNA(RAPD)基因分型技術等。
多重耐藥菌監(jiān)測方案 一、多重耐藥菌(MDRO) 主要時指對臨床使用的三類或三類以上抗菌藥物同時呈現(xiàn)耐藥的細菌,常見的有耐甲氧金黃葡萄球菌(MRSA),耐萬古霉素腸球菌(VRE),產超光譜β-內酰胺酶(ESBLS)細菌,耐碳青霉稀類抗菌藥物腸桿菌(CRE),耐碳青霉稀類抗菌藥物鮑曼不動桿菌(CR-AS),多重耐藥/泛耐藥性銅綠假單胞菌(MDR/PDR-PA)和多重耐藥結核分枝桿菌等 二、多重耐藥菌醫(yī)院感染的預防與控制 (一) 加強醫(yī)務人員手衛(wèi)生 臨床科室特別是新生兒。血液科病房,呼吸科病房,神經科病房等多重耐藥菌醫(yī)院感染重點科室,要配備足夠的洗手設施和速干手消毒液,提高醫(yī)務人員手衛(wèi)生的依從性 醫(yī)務人員對患者實施以下診療,護理活動過程中必須洗手或使用速干手消毒劑進行手消毒 1在直接接觸患者前后 2進行無菌技術操作和侵入性操作前后 3接觸患者使用的物品或處理患者分泌物,排泄物后 4摘手套后 (二)1應對多重耐藥菌感染患者和定植患者實施隔離措施,首選單間隔離,也可以將同類多重耐藥菌感染者或定植者安置在同一房間,隔離病房不足時才考慮進行床邊隔離不能與氣管插管,深靜脈留
置導管,有開放傷口或者免疫功能抑制患者安置在同一房間,當感染者較多時,應保護性隔離未感染者 2放置隔離病房,應在門上懸掛接觸隔離標識,控制無關 人員進入,進行床邊隔離時,在床頭卡上粘貼接觸隔離標識,以提醒醫(yī)務人員以及家屬采取床邊隔離措施 3醫(yī)務人員對患者實施診療,護理操作時,應先診療護理 其它病人,將高度疑似和MDRO感染病人的診療護理操作安排在最后進行 4應盡量減少與感染者或定植者相接觸的醫(yī)務人員數(shù)量, 最好限制每班診療病人者為醫(yī)生,護士各一人,所有診療盡可能由專人完成,包括標本的采集 5按照衛(wèi)生部《抗菌藥物臨床應用指導原則》要求,嚴格 執(zhí)行無菌藥物臨床應用的基本原則,正確合理使用抗菌藥物,減少或延緩多重耐藥菌的產生 6嚴格遵守無菌技術操作規(guī)程,特別是實施中心靜脈置管, 氣管切開,氣管插管,留置導尿放置引流管等侵入性操作時,應當避免污染,減少感染的危險因素 7在實施診療護理操作中,有可能接觸患者的傷口,潰爛 面,粘膜,體液,引流液,分泌物,排泄物時,應當戴手套,與病人或其環(huán)境有大面積接觸或病人有大便失禁等情況時,需要加穿隔離衣,離開病人床旁或房間時,須把防護用品脫下,并洗手或用快速手消毒劑擦手
8對于直接接觸患者的診療器械,器具及物品(如血壓計, 聽診器,體溫表,輸液架)等應專人專用及時消毒,其它不能專人的物品(如輪椅,擔架)在每次使用后必須消毒 9對醫(yī)務人員和患者經常接觸的物體表面,設備設施表面 (如心電監(jiān)護儀,呼吸機,微量輸液泵等醫(yī)療儀器的面板或旋鈕表面。計算機鍵盤和鼠標,電話,患者床欄,門把手,水龍頭開關等)應當每天進行擦拭消毒,被患者血液,體液污染時,立即系哦阿杜,抹布等用具應專用,使用過的抹布,拖布等必須消毒處理 10銳器放置在銳器盒中,其余醫(yī)療飛舞均放置在黃色垃 圾袋中按醫(yī)療廢物處置 11感染者或攜帶者應隔離至連續(xù)3各標本(每次間隔>24 小時)培養(yǎng)均陰性,方可解除隔離
抗Hp治療失敗的原因可能是所使用的抗生素耐藥,故再次治療前常常需要評估Hp抗生素耐藥性。
傳統(tǒng)方法檢測Hp抗生素耐藥性主要局限于藥物敏感性試驗。藥物敏感性試驗簡稱藥敏試驗(或耐藥試驗),旨在了解病原微生物對各種抗生素的敏感(或耐受)程度,以指導臨床合理選用抗生素藥物的微生物學試驗。
其包括抗生素濃度梯度法(E-test法)、紙片擴散法和稀釋法(包括瓊脂和肉湯稀釋法)。紙片擴散法是將含有定量抗生素藥物的濾紙片貼在已接種了測試菌的瓊脂表面上,紙片中的藥物在瓊脂中擴散,隨著擴散距離的增加,抗生素的濃度呈對數(shù)減少,從而在紙片的周圍形成濃度梯度。
同時,紙片周圍抑菌濃度范圍內的菌株不能生長,而抑菌范圍外的菌株則可以生長,從而在紙片的周圍形成透明的抑菌圈,抑菌圈的大小可以反映測試菌對藥物的敏感程度,并與該藥物對測試菌的最低抑菌濃度呈負相關。稀釋法分為瓊脂稀釋法和肉湯稀釋法。
實驗時,經過倍比稀釋的抗生素濃度為能抑制待測菌肉眼可見生長的最低藥物濃度(MIC)。 但藥敏試驗有其缺點,如E-test法耗材昂貴,紙片擴散法缺乏有效的判斷標準,瓊脂稀釋法對操作技術要求較高,而且藥敏試驗不能鑒定Hp菌株基因突變的位點。
另外,Hp對培養(yǎng)要求苛刻,微需氧條件下生長緩慢,不適合臨床常規(guī)開展。
病毒基因DNA定性定量檢測和高通量病毒基因變異(耐藥)生物芯片檢測,對實現(xiàn)乙肝的科學轉陰有了堅實的、精準的數(shù)據支持,專家根據這些數(shù)據來判斷該病人是否需要治療、什么藥物有效,什么藥物無效,這樣的治療的方案成功的幾率相當大。
如:若患者的P區(qū)基因發(fā)生突變,表明系長期服用核苷類藥物所致,繼續(xù)服用可導致病情加重;X區(qū)變異的患者則極易發(fā)生爆發(fā)性肝病、肝硬化和肝腫瘤,需高度警惕;C區(qū)基因變異則表明采用干擾素無用;S區(qū)基因變異表明疫苗無效。據了解,這兩種高科技乙肝病毒檢測方法,對實驗室的條件、操作者的技術等都有很高的要求。
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