細(xì)胞室使用(細(xì)胞療法標(biāo)本采集注意事項(xiàng))

1.細(xì)胞療法標(biāo)本采集注意事項(xiàng)有哪些?

(1) 采集標(biāo)本前，先認(rèn)真核對(duì)，準(zhǔn)備好專用的無(wú)菌容器和酒精燈等；檢查容器有無(wú)裂縫、瓶塞有無(wú)松動(dòng)、培養(yǎng)基是否足夠、培養(yǎng)液有無(wú)渾濁和變質(zhì)等；填寫瓶簽，在無(wú)菌容器外面貼上瓶簽，標(biāo)明科室、床號(hào)、姓名、性別、住院號(hào)或ID號(hào)、治療目的 （細(xì)胞類別）、抽血量、送檢日期和時(shí)間等。

（2） 采集標(biāo)本前、中、后及制備操作前均應(yīng)仔細(xì)“三查八對(duì)”，逐項(xiàng)核查，以免發(fā)生差錯(cuò)，并向患者說(shuō)明抽血的相關(guān)注意事項(xiàng)及回輸?shù)臅r(shí)間，以消除顧慮，取得患者及其家屬配合。 （3） 采集的標(biāo)本，均須及時(shí)放入無(wú)菌容器內(nèi)，禁止左右、上下?lián)u動(dòng)和振動(dòng)，只需用雙手心輕輕揉搓即可；采集標(biāo)本時(shí)應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作，不可混入防腐劑、消毒劑及其他藥物，以免影響細(xì)胞制備的結(jié)果；封蓋前用酒精燈常規(guī)滅菌瓶蓋和瓶口加蓋固封。

對(duì)疑有菌血癥、敗血癥等的患者，不應(yīng)作為細(xì)胞供體。 （4） 釆集各種標(biāo)本均應(yīng)按照操作規(guī)程進(jìn)行，做到及時(shí)采集， 標(biāo)本新鮮，量準(zhǔn)確，注意及時(shí)送往細(xì)胞培養(yǎng)室，不應(yīng)放置過(guò)久， 以免影響細(xì)胞制備的效能，特殊標(biāo)本要有特殊注明。

2.分子生物學(xué)體外細(xì)胞培養(yǎng)具體操作過(guò)程和注意事項(xiàng)

一、準(zhǔn)備工作 準(zhǔn)備工作對(duì)開展細(xì)胞培養(yǎng)異常重要，工作量也較大，應(yīng)給予足夠的重視，推備工作中某一環(huán)節(jié)的疏忽可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或無(wú)法進(jìn)行。準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無(wú)菌室或超凈臺(tái)的清潔與消毒，培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試。

二、取材 在無(wú)菌環(huán)境下從機(jī)體取出某種組織細(xì)胞（視實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ǎ?，?jīng)過(guò)一定的處理（如消化分散細(xì)胞、分離等）后接入培養(yǎng)器血中，這一過(guò)程稱為取材。如是細(xì)胞株的擴(kuò)大培養(yǎng)則無(wú)取材這一過(guò)程。機(jī)體取出的組織細(xì)胞的首次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。

理論上講各種動(dòng)物和人體內(nèi)的所有組織都可以用于培養(yǎng)，實(shí)際上幼體組織（尤其是胚胎組織）比成年個(gè)體的組織容易培養(yǎng)，分化程度低的組織比分化高的容易培養(yǎng)，腫瘤組織比正常組織容易培養(yǎng)。取材后應(yīng)立即處理，盡快培養(yǎng)，因故不能馬上培養(yǎng)時(shí)，可將組織塊切成黃豆般大的小塊，置4℃的培養(yǎng)液中保存。取組織時(shí)應(yīng)嚴(yán)格保持無(wú)菌，同時(shí)也要避免接觸其他的有害物質(zhì)。取病理組織和皮膚及消化道上皮細(xì)胞時(shí)容易帶菌，為減少污染可用抗菌素處理。

三、培養(yǎng) 將取得的組織細(xì)胞接入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過(guò)程稱為培養(yǎng)。如系組織塊培養(yǎng)，則直接將組織塊接入培養(yǎng)器皿底部，幾個(gè)小時(shí)后組織塊可貼牢在底部，再加入培養(yǎng)基。如系細(xì)胞培養(yǎng)，一般應(yīng)在接入培養(yǎng)器皿之前進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，按要求以一定的量（以每毫升細(xì)胞數(shù)表示）接入培養(yǎng)器皿并直接加入培養(yǎng)基。細(xì)胞進(jìn)入培養(yǎng)器皿后，立即放入培養(yǎng)箱中，使細(xì)胞盡早進(jìn)入生長(zhǎng)狀態(tài)。

正在培養(yǎng)中的細(xì)胞應(yīng)每隔一定時(shí)間觀察一次，觀察的內(nèi)容包括細(xì)胞是否生長(zhǎng)良好，形態(tài)是否正常，有無(wú)污染，培養(yǎng)基的PH是否太酸或太堿（由酚紅指示劑指示），此外對(duì)培養(yǎng)溫度和CO2濃度也要定時(shí)檢查。

原代培養(yǎng)一般有一段潛伏期（數(shù)小時(shí)到數(shù)十天不等），在潛伏期細(xì)胞一般不分裂，但可貼壁和游走。過(guò)了潛伏期后細(xì)胞進(jìn)入旺盛的分裂生長(zhǎng)期。細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶底后要進(jìn)行傳代培養(yǎng)，將一瓶中的細(xì)胞消化懸浮后分至兩到三瓶繼續(xù)培養(yǎng)。每傳代一次稱為“一代”。二倍體細(xì)胞一般只能傳幾十代，而轉(zhuǎn)化細(xì)胞系或細(xì)胞株則可無(wú)限地傳代下去。轉(zhuǎn)化細(xì)胞可能具有惡性性質(zhì)，也可能僅有不死性（Immortality）而無(wú)惡性。

四、凍存及復(fù)蘇 為了保存細(xì)胞，特別是不易獲得的突變型細(xì)胞或細(xì)胞株，要將細(xì)胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度-196℃，將細(xì)胞收集至凍存管中加入含保護(hù)劑（一般為二甲亞砜或甘油）的培養(yǎng)基，以一定的冷卻速度凍存，最終保存于液氮中。在極低的溫度下，細(xì)胞保存的時(shí)間幾乎是無(wú)限的。復(fù)蘇一般采用快融方法，即從液氮中取出凍存管后，立即放入37℃水中，使之在一分鐘內(nèi)迅速融解。然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)器皿中進(jìn)行培養(yǎng)。

凍存過(guò)程中保護(hù)劑的選用、細(xì)胞密度、降溫速度及復(fù)蘇時(shí)溫度、融化速度等都對(duì)細(xì)胞活力有影響。

五、常用儀器設(shè)備 無(wú)菌室，超凈工作臺(tái)，三重純水蒸餾器，抽氣泵，壓力蒸氣消毒器，電熱恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)器具，CO2培養(yǎng)箱，恒溫水浴鍋，倒置顯微鏡，離心機(jī)，無(wú)菌過(guò)濾器，洗刷裝置，細(xì)胞計(jì)數(shù)板和電子細(xì)胞技術(shù)儀等等。

3.觀察植物細(xì)胞時(shí)顯微鏡使用注意事項(xiàng)

1.右手握住鏡臂，左手托住鏡座。

2.把顯微鏡放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，略偏左（顯微鏡放在距實(shí)驗(yàn)臺(tái)邊緣7厘米左右處）。安裝好目鏡和物鏡。

二、對(duì)光 3.轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，使低倍物鏡對(duì)準(zhǔn)通光孔（物鏡的前端與載物臺(tái)要保持2厘 米的距離）。 4.把一個(gè)較大的光圈對(duì)準(zhǔn)通光孔。

左眼注視目鏡內(nèi)（右眼睜開，同時(shí)畫圖）。轉(zhuǎn)動(dòng)反光鏡，使光線通過(guò)通光孔反射到鏡筒內(nèi)。

通過(guò)目鏡，可以看到白亮的視野。 三、觀察 5.把所要觀察的玻片標(biāo)本（也可以用印有“6”字的薄紙片制成）放在載物臺(tái)上，用壓片夾壓住，標(biāo)本要正對(duì)通光孔的中心。

6.轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋，使鏡筒緩緩下降，直到物鏡接近玻片標(biāo)本為止（眼睛看著物鏡，以免物鏡碰到玻片標(biāo)本）。 7.左眼向目鏡內(nèi)看，同時(shí)反方向轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋，使鏡筒緩緩上升，直到看清物像為止。

再略微轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，使看到的物像更加清晰。 注意事項(xiàng)：實(shí)驗(yàn)完畢，把顯微鏡的外表擦拭干凈。

轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，把兩個(gè)物鏡偏到兩旁，并將鏡筒緩緩下降到最低處。最后把顯微鏡放進(jìn)鏡箱里，送回原處。

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