rna加工方法(RNA合成的方法)
1.RNA合成的方法
RNA聚合酶I催化的轉(zhuǎn)錄起始RNA聚合酶I催化前rRNA(40S RNA)的合成。前rRNA基因轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)上游有兩個順式作用元件（cis acting element），一個是跨越起始點(diǎn)的核心元件（core element），另一個在–100bp處有上游調(diào)控元件（upstream control element,UCE）。RNA聚合酶I催化的轉(zhuǎn)錄需要2種轉(zhuǎn)錄因子，分別稱為上游結(jié)合因子（upstream binding factor,UBF）和選擇性因子1(selective factor1,SL1)。SL1含有4個亞基，一個是TATA盒結(jié)合蛋白（TATA-binding protein,TBP），另3個是TBP相關(guān)因子（TBP-associated factors,TAF）。UBF與DNA結(jié)合令模板DNA發(fā)生彎曲，使相距上百bp的UCE和核心元件靠攏，接著SL1和pol I相繼結(jié)合到UBF-DNA復(fù)合物上，完成起始復(fù)合物的組建，開始轉(zhuǎn)錄
RNA聚合酶Ⅲ催化的轉(zhuǎn)錄起始RNA聚合酶Ⅲ催化tRNA,5S rRNA和7S rRNA的轉(zhuǎn)錄，tRNA基因的轉(zhuǎn)錄初產(chǎn)物是tRNA的前體，經(jīng)加工后產(chǎn)生多個成熟tRNA。在DNA上的調(diào)控序列位于起始轉(zhuǎn)錄位點(diǎn)的下游，稱為內(nèi)部啟動子。有二個調(diào)控區(qū)，分別位于編碼tRNA D-環(huán)和Tψ環(huán)的序列，分別稱為A盒和B盒。
1.tRNA轉(zhuǎn)錄后加工
tRNA的轉(zhuǎn)錄后修飾，除了剪接加工外，還包括tRNA鏈上稀有堿基的形成，以及加上3'端的CCA序列。
2.rRNA的轉(zhuǎn)錄后加工
rRNA加工多采用自我剪接的形式。自我剪接的RNA本身形成一種特別的二級結(jié)構(gòu)，稱為錘頭結(jié)構(gòu)。錘頭結(jié)構(gòu)是指復(fù)合的莖環(huán)組成形態(tài)，但其中某些序列上必需是特定的堿基所占據(jù)。這種RNA結(jié)構(gòu)，不需要任何蛋白質(zhì)，就可以水解RNA鏈上某一特定位點(diǎn)的磷酸二酯鍵。也就是說，這是一種起催化作用的RNA，現(xiàn)稱為核酶。核酶的發(fā)現(xiàn)，對酶學(xué)、分子生物學(xué)，進(jìn)化生物學(xué)都是重要的理論更新，而且，醫(yī)學(xué)上已開始利用人工設(shè)計(jì)的核酶，去消滅一些作為病原體的RNA病毒或消除一些不利于生命活動的細(xì)胞內(nèi)RNA。
2.mRNA前體的加工過程有哪些步驟
mRNA前體的加工過程有哪些步驟：
原核生物轉(zhuǎn)錄作用生成的mRNA屬于多順反子mRNA，即由操縱子機(jī)制控制生成的一條mRNA可編碼幾種不同的蛋白質(zhì)。原核生物轉(zhuǎn)錄生成的初級轉(zhuǎn)錄本mRNA不需經(jīng)過復(fù)雜的加工過程即可表現(xiàn)功能，惟一的加工過程是多順反子mRNA在RnaseⅢ的催化下裂解為單個的順反子。
真核生物轉(zhuǎn)錄生成的是單順反子mRNA，其前體是非均一RNA(hnRNA)。hnRNA加工過程包括。
剪接
真核生物的基因是一種斷裂基因，即其結(jié)構(gòu)基因由若干編碼序列和非編碼序相間排列而成，其中為蛋白質(zhì)編碼的可轉(zhuǎn)錄序列稱為外顯子，不為蛋白質(zhì)編碼的可轉(zhuǎn)錄序列為內(nèi)含子。轉(zhuǎn)錄合成的hnRNA需經(jīng)過剪接、切掉內(nèi)含子部分，然后再將外顯子部分拼接起來。該過程有多種酶活性物質(zhì)（包括snRNA）參與。
′末端加“帽”
真核細(xì)胞成熟mRNA的5′末端均有一個特殊的結(jié)構(gòu)，即m7Gpp-pmnNp，稱為“帽”。帽的生成是在細(xì)胞核內(nèi)進(jìn)行的，但胞漿中也有酶體系，動物病毒mRNA加帽過程就是在宿主細(xì)胞的胞漿內(nèi)進(jìn)行的。
′末端加“尾”
mRNA前體分子的3′末端有一段保守序列，由特異的核酸內(nèi)切酶切去多余的核苷酸，然后在多聚A聚合酶的催化下，由ATP聚合生成多聚A尾。該反應(yīng)在核內(nèi)發(fā)生，在胞漿中也可繼續(xù)進(jìn)行。
堿基修飾
mRNA分子中有少量稀有堿基（如甲基化堿基）是在轉(zhuǎn)錄后經(jīng)化學(xué)修飾（如甲基化）而形成的。
選擇性加工
某些MRNA前體含有多個3'剪切位點(diǎn)和多聚腺苷酸化位點(diǎn)，因此利用這些選擇性位點(diǎn)可產(chǎn)生具有不同3'端非編碼區(qū)或者具有不同編碼能力的RNA產(chǎn)物。通過可變剪接途徑可以挑先最保留在MRNA中的外顯子，結(jié)果單個基因可以合成多種不同的蛋白質(zhì)。
RNA編輯
在合成并經(jīng)RNA編輯加工之后，MRNA分子的序列可以發(fā)生改變。個別核苷酸可以被置換，添加或者刪除。編輯過的MRNA翻譯產(chǎn)生了較短脫脂基蛋白B48，由于基缺少一個結(jié)合受體的蛋白結(jié)構(gòu)域，因此功能受限。還有好多其他編輯的例子，陣錐蟲線粒體MRNA發(fā)生RNA編輯，使得最終MRNA中一半以上的尿嘧啶都獲自編輯過程。
3.各種RNA轉(zhuǎn)錄后加工包括哪些內(nèi)容
各種RNA轉(zhuǎn)錄后加工包括哪些內(nèi)容
一.mRNA
(1)首尾的修飾
5'端修飾時(shí)加m7GpppN帽子結(jié)構(gòu)，在核內(nèi)完成。
3'端修飾時(shí)加上多聚腺苷酸尾巴（polyAAAAAAA），在核內(nèi)完成。
(2)mRNA的剪接
從DNA模板鏈轉(zhuǎn)錄出的最初轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中除去內(nèi)含子，并將外顯子連接起來形成一個連續(xù)的RNA分子的過程。
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(3)mRNA編輯
RNA編輯是指在mRNA水平上改變遺傳信息的過程。具體說來，指基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的mRNA分子中，由于核苷酸的缺失，插入或置換，基因轉(zhuǎn)錄物的序列不與基因編碼序列互補(bǔ)，使翻譯生成的蛋白質(zhì)的氨基酸組成，不同于基因序列中的編碼信息現(xiàn)象。
二.tRNA
(1)5'端前導(dǎo)序列由RNaseP切除。
(2)3'端由tRNA核苷酸轉(zhuǎn)移酶加入CCA-OH作為末端。
(3)還包括稀有堿基生成，甲基化等。
三.rRNA
(1)真核生物核內(nèi)是45S的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，是三種rRNA的前身。
(2)形成小亞基18S-RNA。
(3)形成大亞基28S,5.8S的rRNA.
視情況掌握把，重點(diǎn)是mRNA轉(zhuǎn)錄后的加工修飾。也不知道你想問的是不是這個。希望幫到你！
4.提取制備RNA常用的方法有哪幾種,各有何優(yōu)缺點(diǎn)
常見的RNA提取方法有苯酚法、陰離子去污劑法、LiCl一尿素法、改良的Gomez法、異硫氫酸胍法、CTAB法、熱硼酸法及改良熱硼酸法、TRIZOL試劑快速提取法。
RNA提取時(shí)，就變性劑的選擇來說，CTAB(CTAB法)比異硫氰酸胍（RIZOL試劑法）和 SDS（改良熱硼酸法）更有效；就CTAB法來說，由于以CTAB為變性劑，同時(shí)加入PVP和β一巰基乙醇共同作用變性蛋白、抑制RNase的活性，使用無水乙醇或異丙醇沉淀雜蛋白和總核酸等，然后再選擇性地分離出RNA。
5.關(guān)于生物化學(xué),問3種RNA如何進(jìn)行轉(zhuǎn)錄加工,加工到哪些地方
真核生物轉(zhuǎn)錄起始十分復(fù)雜，往往需要多種蛋白因子的協(xié)助，轉(zhuǎn)錄因子與RNA聚合酶Ⅱ形成轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合體，共同參與轉(zhuǎn)錄起始的過程。
根據(jù)轉(zhuǎn)錄因子的作用特點(diǎn)可分為二類；第一類為普遍轉(zhuǎn)錄因子，它們與RNA聚合酶Ⅱ共同組成轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合體時(shí)，轉(zhuǎn)錄才能在正確的位置開始。除TFⅡD以外，還發(fā)現(xiàn)TFⅡA,TFⅡB,TFⅡF,TFⅡE,TFⅡH等，它們在轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合體組裝的不同階段起作用。
第二類轉(zhuǎn)錄因子為組織細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子，這些TF是在特異的組織細(xì)胞或是受到一些類固醇激素\生長因子或其它刺激后，開始表達(dá)某些特異蛋白質(zhì)分子時(shí)，才需要的一類轉(zhuǎn)錄因子。
6.真核生物RNA轉(zhuǎn)錄后加工修飾的方式包括哪些
真核生物 一核糖體RNA：基因拷貝數(shù)多，在幾十到幾千之間。
基因成簇排列在一起，由RNA聚合酶I轉(zhuǎn)錄生成一個較長的前體，哺乳動物為45S。核仁是rRNA合成與核糖體亞基生物合成的場所。
RNA酶III等核酸內(nèi)切酶在加工中起重要作用。5SRNA基因也是成簇排列的，由RNA聚合酶III轉(zhuǎn)錄，經(jīng)加工參與構(gòu)成大亞基。
核糖體RNA可被甲基化，主要在核苷2'羥基，比原核生物甲基化程度高。多數(shù)核糖體RNA沒有內(nèi)含子，有些有內(nèi)含子但不轉(zhuǎn)錄。
二轉(zhuǎn)運(yùn)RNA：由RNA聚合酶III轉(zhuǎn)錄，加工與原核相似，但3'端的CCA都是后加的，還有2'-O-甲基核糖。 三信使RNA：真核生物編碼蛋白質(zhì)的基因以單個基因?yàn)檗D(zhuǎn)錄單位，但有內(nèi)含子，需切除。
信使RNA的原初轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物是分子量很大的前體，在核內(nèi)加工時(shí)形成大小不等的中間物，稱為核內(nèi)不均一RNA(hnRNA)。其加工過程包括： 1.5'端加帽子：在轉(zhuǎn)錄的早期或轉(zhuǎn)錄終止前已經(jīng)形成。
首先從5'端脫去一個磷酸，再與GTP生成5',5'三磷酸相連的鍵，最后以S-腺苷甲硫氨酸進(jìn)行甲基化，形成帽子結(jié)構(gòu)。帽子結(jié)構(gòu)有多種，起識別和穩(wěn)定作用。
2. 3'端加尾：在核內(nèi)完成。先由RNA酶III在3'端切斷，再由多聚腺苷酸聚合酶加尾。
尾與通過核膜有關(guān)，還可防止核酸外切酶降解。 3. 內(nèi)部甲基化：主要是6-甲基腺嘌呤，在hnRNA中已經(jīng)存在。
可能對前體的加工起識別作用。 三、RNA的拼接 一轉(zhuǎn)運(yùn)RNA的拼接：由酶催化，酶識別共同的二級結(jié)構(gòu)，而不是序列。
通常內(nèi)含子插入到靠近反密碼子處，與反密碼子配對，取代反密碼子環(huán)。第一步由內(nèi)切酶切除插入序列，不需ATP；第二步由RNA連接酶連接，需要ATP。
二四膜蟲核糖體RNA的拼接：某些四膜蟲26S核糖體RNA基因中有一個內(nèi)含子，其拼接只需一價(jià)和二價(jià)陽離子及鳥苷酸或鳥苷存在即可自發(fā)進(jìn)行。其實(shí)質(zhì)是磷酸酯的轉(zhuǎn)移反應(yīng)，鳥苷酸起輔助因子的作用，提供游離3'羥基。
三信使RNA：真核生物編碼蛋白質(zhì)的核基因的內(nèi)含子屬于第二類內(nèi)含子，左端為GT，右端為AG。先在左端切開，產(chǎn)生的5'末端與3'端上游形成5',2'-磷酸二酯鍵，構(gòu)成套索結(jié)構(gòu)。
然后內(nèi)含子右端切開，兩個外顯子連接起來。通過不同的拼接方式，可形成不同的信使RNA。
7.真核生物mRNA加工主要包括哪些步驟
真核生物mRNA加工主要包括哪些步驟
真核生物 一核糖體RNA：基因拷貝數(shù)多，在幾十到幾千之間。基因成簇排列在一起，由RNA聚合酶I轉(zhuǎn)錄生成一個較長的前體，哺乳動物為45S。核仁是rRNA合成與核糖體亞基生物合成的場所。RNA酶III等核酸內(nèi)切酶在加工中起重要作用。5SRNA基因也是成簇排列的，由RNA聚合酶III轉(zhuǎn)錄，經(jīng)加工參與構(gòu)成大亞基。核糖體RNA可被甲基化，主要在核苷2'羥基，比原核生物甲基化程度高。多數(shù)核糖體RNA沒有內(nèi)含子，有些有內(nèi)含子但不轉(zhuǎn)錄。 二轉(zhuǎn)運(yùn)RNA：由RNA聚合酶III轉(zhuǎn)錄，加工與原核相似，但3'端的CCA都是后加的，還有2'-O-甲基核糖。 三信使RNA：真核生物編碼蛋白質(zhì)的基因以單個基因?yàn)檗D(zhuǎn)錄單位，但有內(nèi)含子，需切除。信使RNA的原初轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物是分子量很大的前體，在核內(nèi)加工時(shí)形成大小不等的中間物，稱為核內(nèi)不均一RNA(hnRNA)。其加工過程包括： 1.5'端加帽子：在轉(zhuǎn)錄的早期或轉(zhuǎn)錄終止前已經(jīng)形成。首先從5'端脫去一個磷酸，再與GTP生成5',5'三磷酸相連的鍵，最后以S-腺苷甲硫氨酸進(jìn)行甲基化，形成帽子結(jié)構(gòu)。帽子結(jié)構(gòu)有多種，起識別和穩(wěn)定作用。 2. 3'端加尾：在核內(nèi)完成。先由RNA酶III在3'端切斷，再由多聚腺苷酸聚合酶加尾。尾與通過核膜有關(guān)，還可防止核酸外切酶降解。 3. 內(nèi)部甲基化：主要是6-甲基腺嘌呤，在hnRNA中已經(jīng)存在?？赡軐η绑w的加工起識別作用。 三、RNA的拼接 一轉(zhuǎn)運(yùn)RNA的拼接：由酶催化，酶識別共同的二級結(jié)構(gòu)，而不是序列。通常內(nèi)含子插入到靠近反密碼子處，與反密碼子配對，取代反密碼子環(huán)。第一步由內(nèi)切酶切除插入序列，不需ATP；第二步由RNA連接酶連接，需要ATP。 二四膜蟲核糖體RNA的拼接：某些四膜蟲26S核糖體RNA基因中有一個內(nèi)含子，其拼接只需一價(jià)和二價(jià)陽離子及鳥苷酸或鳥苷存在即可自發(fā)進(jìn)行。其實(shí)質(zhì)是磷酸酯的轉(zhuǎn)移反應(yīng)，鳥苷酸起輔助因子的作用，提供游離3'羥基。 三信使RNA：真核生物編碼蛋白質(zhì)的核基因的內(nèi)含子屬于第二類內(nèi)含子，左端為GT，右端為AG。先在左端切開，產(chǎn)生的5'末端與3'端上游形成5',2'-磷酸二酯鍵，構(gòu)成套索結(jié)構(gòu)。然后內(nèi)含子右端切開，兩個外顯子連接起來。通過不同的拼接方式，可形成不同的信使RNA。
